实验1 微生物实验室规则 实验2培养基配制及灭菌-2020.pptVIP

3 实验材料 （1）药品 琼脂粉、酵母膏（粉）、蛋白胨、NaCl等。 （2）器材 天平（6台）、称量纸、量筒、烧杯、玻璃棒、pH试纸、标签，纱布（8层纱布，包扎瓶口用，每组1份）、报纸、三角瓶、绳子、酒精灯、火柴、药勺（4把）、高压蒸汽灭菌锅（1台）、烘箱（1台）、光波炉（6台）等。 4 操作步骤 4.1 培养基的配制 LB固体培养基(Luria-Bertani medium)为例 LB 酵母粉 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂粉或琼脂条 12-15g 蒸馏水 1000 ml pH 7.2-7.8 依上述配方配制150 ml， 请换算好相应的质量数。 （称量纸，药勺，天平， 烧杯，量筒，三角瓶） 倒平板（6个） 干热或湿热？ 4.2 灭菌 干热灭菌操作步骤： （1）用报纸条包好干燥的培养皿。 （2）将待灭菌物品均匀放入烘箱内。 （3）开启电源，设定温度和时间（ 160－170℃，2小时 ）。 （4）切断电源，待温度降至70℃以下时，打开箱门，取出灭菌物品。 湿热灭菌操作步骤： （1）灭菌物准备 （2）高压蒸汽灭菌 加水、装锅；接通热源，设置参数（ 121℃，15min－30min ）；升压、升温；切断电源；取出灭菌物；待培养基冷却后倒板，置于37℃恒温箱内培养24 h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。 4.3 制备LB琼脂平板 待培养基冷却至45-60 ℃ （不烫手）时，于洁净工作台或酒精灯火焰无菌区均匀倒入已灭菌的培养皿中（每个约20-30 ml），冷却后凝固成固体胶状平板（LB平板）。倒扣，于室温或37摄氏度放置24 h，进行无菌验证。 观察培养基配制过程的细节、时间、配制结果，无菌验证结果等等等。 自主实验（独立） 每人携带3个平板，自己设计实验（参考借鉴实验3实验室环境及人体表面微生物的检查分离），分离培养微生物。 倒扣培养，尽可能密封。注意每天观察，描述。（采集的样品、生长的状况[时间，快慢]、种类、数量、颜色、形状、湿润度、透明度、凸起状况），下次课带回实验室分享实验结果并作为各自实验的研究材料。9月29日统一回实验室，4℃放置备用。 此部分独立评分，算一次独立科创实验。 我为自己的实验负责，不做伤害自己、他人及社会的事情。 5 思考题 （1）为什么LB培养基配制好后必须立即灭菌？采用那种灭菌方式？如何设计实验验证其灭菌效果。 （2）查阅资料，分离海水和湖水中的常见细菌一般分别采用什么培养基，写出培养基配方。 （3）为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温 度高，时间长？各自的应用范围如何？ （4）紫外线灭菌的原理是什么？应用范围如何？ （5）配制抗生素溶液该如何除菌（灭菌）？ * 对号入座（班长安排并登记）2人一组（最后一组可以3人）（按学号安排） 陈明霞博士 电 话电子信箱：chenmx1257@163.com 课程qq 群: 223989145 数字课程（校百门优质课程）：/portal/session/bulletin/index/4752.mooc 实验1 微生物实验室规则、工作环境要求、实验记录、常用器皿材料和仪器设备 如何进行微生物学实验 严肃认真 科学态度 分析问题 搞清原理 课堂纪律 对号入座（班长安排并登记）； 严格遵守实验室规章制度（穿白大褂、不穿短裤裙子拖鞋凉鞋、长发盘起、戴口罩和手套、仪器使用登记、操作台保持整洁）； 严肃课堂纪律； 不允许无故旷课、早退。 实验室安全须知/承诺书 每个实验室 每个实验项目 实验安全考试证书 * 实验室安全 实验室严禁吸烟 注意用水、用电和防火 正确使用化学试剂和仪器 正确清洗器具 禁止在实验室吃东西及饮水，与实验无关物品放于走廊物品柜或实验室柜子内 实验废弃物分类处理，勿污染环境 规范学生个人防护 * 实验无关物品：学生储物柜 * 实验室卫生 每次实验需留下4-6名同学值日，协助保持实验室公共区域清洁（班长安排）。 每次实验后各小组各自清理台面并将椅子倒放桌上。 实验预习报告及实验结果 微生物学实验进度表 考核方式 评分标准 (1) 出勤情况 出勤分数根据课堂点名到场情况评定。满勤为100分，迟到一次扣除5分，缺勤一次扣除20分。多次迟到加倍扣分，缺勤两次及以上，则重修本课程。 (2) 课堂表现 课堂表现分每次100分，若学生在课堂上有讲话、玩手机、睡觉、不独立操作或消极应付实验等等影响课堂教学现象，每项目每次扣5分，扣完为止。 (3) 卫生行为习惯 每次实验为100分，保持实验环境的卫生整齐、遵守实验室的规章制度、合理使用仪器、着