蛋白质溶液的浓缩方法精品课件.pptVIP

2021/8/23 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 精品PPT 可修改 2021/8/23 2.1 透析袋吸附法 2.2 凝胶吸附法 2. 吸附法 2021/8/23 吸附法 定义：通过吸附剂直接去除溶液中的水分子以达到浓缩蛋白质溶液的目的。 吸附法是最简单快速的浓缩蛋白质溶液的方法，所需仪器简单，特别适用于稳定性较差的蛋白质。 吸附剂的选择： （1）吸附剂不能与溶液发生化学反应； （2）吸附剂对蛋白质不吸附； （3）吸附剂易于溶液分开。 常用的吸附剂：PEG、聚乙烯吡咯酮、蔗糖、凝胶等。 常用的吸附方法：透析袋法和凝胶浓缩法。 2021/8/23 2.1 透析袋吸附法 透析袋吸附法在透析技术的基础上改良而来的。 传统的透析是基于分子质量大小的液相分离技术，它由透过半透膜的选择性扩散来实现。但是纯粹的透析主要用于除去小分子类的溶质，而要达到浓缩（即除去溶剂）的目的则费时较长。 透析袋吸附法是将透析液换成可以吸水的溶液或者固体吸附剂，这样可实现很好的浓缩作用。 2021/8/23 2.1 透析袋吸附法 具体操作： 将蛋白质溶液加入到透析袋中（无透析袋可以用玻璃纸代替），结扎好后将PEG、蔗糖等吸附剂撒在透析袋外；或者把吸水剂配成30%-40%的溶液，将装有蛋白质溶液的透析袋放入吸附剂溶液中。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后重复利用。 优缺点： 优点：该方法简单高效，操作过程中可以保持蛋白质不变性，吸附剂可回收利用。 缺点：蛋白质可能吸附在透析膜上，导致回收率低。操作过程需要低温。 2021/8/23 2.2 凝胶吸附法 定义：凝胶是一种惰性多孔聚合物，孔径较小的凝胶具有很强的吸水性，适宜浓缩分子量在10000以上的蛋白质。 常用的凝胶有Sephadex G系列以及Bio-GelP系列凝胶。 具体操作：将干的凝胶加入到蛋白质溶液中吸收水分子和其他小分子，当凝胶完全膨胀后，用过滤或立信德方法除去凝胶，即可得到浓缩后的蛋白质溶液。 注意事项：溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在凝胶表面会产生阳离子交换，影响蛋白质的回收率。 2021/8/23 3.1 原理 3.2 操作过程 3. 真空冷冻干燥法 2021/8/23 3.1 原理 冻干法是指将蛋白质溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，除去冰晶，待升华结束后再进行解吸干燥，除去部分结合水的干燥方法，最终达到浓缩蛋白质溶液的目的。 2021/8/23 3.1 原理 蛋白 冻干粉 冷冻 初级干燥 二次干燥 避光贮存 冷冻速率会影响最终产品的质量。慢速冷冻，快速冷冻。 80% 的溶剂被除去，残留的溶剂以湿气的形式吸附在产品上。 残留溶剂降低到足以抑制微生物生长或化学反应发生的水平，同时保持了冻干蛋白的活性和完整性。 需要使用时，加蒸馏水或生理盐水制成悬浮液，即可恢复原状态。 2021/8/23 3.2 操作过程 油面一定不能低于油镜的中线。严禁无油或低油位开启真空泵。 2021/8/23 4.1 原理 4.2 超滤装置及类型 4. 超滤法 4.3 超滤膜的选择 4.4 注意事项 2021/8/23 4.1 原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术。 实验室常用超滤管和冷冻离心机，实现蛋白质溶液的超滤浓缩。 2021/8/23 4.2 装置及类型 2021/8/23 4.2 装置及类型 超滤装置 装置较简单，只是在密闭的容器中施加一定压力，使小分子和溶剂分子挤压出膜外。无搅拌装置 浓差极化严重，只适于浓度较稀的少量超滤。 超滤装置位于电磁搅拌器之上。向容器内施加压力的同时开动磁力搅拌器，大分子向滤膜表面堆积时，被电磁搅拌器分散到溶液中。 浓度极化较弱，超滤速度略有提高。 在一支空心柱内装有许多中空纤维毛细管，两端相通，管的内径一般在0.2mm左右，有效面积可以达到1平方厘米。 极