葡萄球菌的鉴定.pptVIP

大小 形状 突起 边缘 表面 溶血 色素 气味 * 实验七 葡萄球菌鉴定 检验系微生物教研室 （一）葡萄球菌检验程序 脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液 脑脊液　　　血液 粪便、呕吐物 直接涂片染色 增菌培养 分离培养 （血平板） 分离培养 （高盐甘露醇平板） 取可疑菌落 鉴定试验　　　　　药敏试验 涂片染色 触媒 血浆凝固酶 甘露醇发酵 耐热核酸酶 其他鉴定试验 报　告 初 报 （二）目的要求 掌握：葡萄球菌属的菌落形态、菌体特点、 染色性和基本生化反应及分离培养和鉴定方法； MRS和D试验的方法和结果判定 熟悉：各生化反应原理及和MRS、D试验方法注意事项 （三）实验器材 菌种：金葡菌（临床菌株，ATCC 25923 ,ATCC29213） 表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、 MRSA D-试验阴性、阳性葡萄球菌 培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管 试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片 其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等 （四）步骤方法 1.细菌菌落特征观察： 大小 形态 光泽 表面 边缘 透明度 颜色 溶血 金葡 表葡 腐生 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 2.细菌革兰染色： G+C, d 0.5-1.5um, 散在 或不规则葡萄状 初染1min 涂片 生理盐水 接种环 结晶紫 碘液 95%乙醇 复红 自然干燥 媒染1min 脱色30s 复染30s 干燥镜检 固定 干燥镜检 3.生化反应鉴定 （1）触酶试验 【原理】 H2O2 H2O + O2 【操作】取洁净玻片一张，滴加3％ H202一滴，以接种环分别取待检细菌培养物少许，在H202中磨匀，立即观察结果 【结果】阳性为半分种内产生大量气泡。葡萄球菌为阳性，链球菌为阴性。 【意义】 触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。 过氧化氢酶 （2）血浆凝固酶试验 【原理】致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附于细胞表面生成凝块。 【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性 【意义】血浆凝固酶试验可区分致病性和非 致病性葡萄球菌 【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。 玻片法 【操作】 试管法 【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。 【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃孵育18-24h观察结果。 【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性 血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌 （3）甘露醇发酵试验： 金葡 表葡 腐生 血浆凝固酶 甘露醇发酵 （4）新生霉素敏感试验 血平板 菌悬液涂布 5ug/L新生霉素纸片 35℃孵育16~18h S:抑菌圈直径16mm，R:≤16mm 结果 ATCC25923 表葡 腐生 S R 大小 形状 突起 边缘 表面 溶血 色素 气味 *