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第 PAGE \* Arabic 21 页第 PAGE \* Arabic 21 页 生物工程下游技术大纲汇总 第一章 绪 论（3学时） 【掌握】 1、 生物技术与生物分离的基本概念；2、生物分离的特点和原理；3、生物分离的一般流程 【熟悉】 生物分离效率的概念 【掌握】1． 生物技术与生物分离的基本概念 生物技术：是有机体的操作和应用有机体生产有用物质、改善人类生存环境的技术。 生物分离：生物工程中生物产品如生化制品、蛋白质、多核苷酸和细胞等的分离和纯化。是生物技术的重要组成部分。 2．生物分离的特点和原理 （一）生物分离的特点：① 产物浓度低的水溶液 (原因：a 氧传递限制；b 细胞量; c 产物抑制） 发酵液：0.1-10g/L；动物细胞培养液：5-50mg/L ② 组分复杂 (a 大分子;b 小分子;c 可溶物;d 不可溶物;e 化学添加物） 大分子物质：核酸、蛋白质、多糖、类脂等 小分子物质：代谢产物，如氨基酸、有机酸、生物碱、可溶性与不可溶物质 ③ 产物稳定性差 产物失活（化学和微生物降解） a. 化学降解(pH , 温度); b. 微生物降解（酶作用， 染菌） ④ 质量要求高 （药品或食品）： 安全性：除去热原 纯度：蛋白类药物中杂蛋白2%，胰岛素中0.01% ⑤ 分批操作，生物变异性大 （二）生物分离的原理：① 细胞回收技术: 絮凝，离心，过滤，微过滤。 ② 细胞破碎技术: 球磨，均质机，化学破碎技术 ③ 初步纯化技术: 吸附剂，离子交换，沉淀（盐析法、有机溶剂、等电点），溶剂萃取，两水相萃取，超临界萃取，逆胶束萃取，膜分离技术 ④ 高度纯化技术: 各类层析，亲和，疏水，聚焦，离子交换，结晶 ⑤ 成品加工：浓缩，除菌与热原，喷雾干燥，气流干燥，沸腾干燥，冷冻干燥 3．生物分离的一般流程（看书3页，图1.1） 原料→ 细胞分离→ 细胞破碎→ 粗分离→ 纯化→ 脱盐→ 浓缩→ 成品化 【熟悉】生物分离效率的概念 生物分离工程研究的根本任务是设计和优化分离过程，提高分离效率，减少分离过程步骤，缩短分离操作时间，达到提高产品收率与活性，降低生产成本。 最终目的：以最低成本，获得达到要求的产品。手段：提高生物分离效能。 效能提高，可通过改进：分离工艺过程和分离方法与设备。 在设计分离过程前，必须考虑哪些问题方能确保我们所设计的工艺过程最为经济、可靠？ 产品价值、产品质量、产物在生产过程中出现的位置、杂质在生产过程中出现的位置、主要杂质独特的物化性质是什么、不同分离方法的技术经济比较。 效能评判Evalution：在生物大分子分离过程中，常使用如下指标： 比活：目标产物单位活性 产率：产物活性与总活性之比 纯化倍数：产物比活与初始比活之比 注：上游工程：物种选育、基因工程、细胞工程 下游工程：包括固液分离技术（离心分离、过滤分离、沉淀分离等工艺）、细胞破壁技术（超声、高压剪切、渗透压、表面活性剂和溶壁酶等）、蛋白质纯化技术（沉淀法、色谱分离法和超滤法等）、产品的包装处理技术（真空干燥和冰冻干燥等。） 分离用：离心机：实验室——生产 破碎用：均质机：实验室——生产 纯化用：色谱：实验室——生产 精制用：冷冻干燥机：实验室——生产 细胞破碎与分离（3学时） 【掌握】 发酵液预处理的方法 ；2. 细胞分离与细胞破碎的方法 【掌握】1. 发酵液预处理的方法 预处理目的：1.改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离器的效率；2.尽可能使产物转入便于后处理的某一相中(多数是液相)；3.去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作 手段：加热、调节pH、加入中性盐凝聚和高分子絮凝剂。 2. 细胞分离与细胞破碎的方法 （一）细胞分离： 原因：成分复杂、目的物特性：含量低，、方便后续操作。常用手段：重力沉降、离心分离、过滤。 1、重力沉降：当一固体微粒通过无限连续介质时，它的运动速度受三种力的影响：一是微粒受到因微粒和流体介质间密度不同而产生的浮力作用；二是微粒所受到的流体阻力作用，三是重力。 沉降方程、Stokes定律（看书本13页） 2、离心沉降：离心力场下单位质量的物质受到的离心力 离心力、离心程度参数Z看书本14页）并不是Z越大，越容易分开，仅代表离心物质沉降速度越快 沉降系数S是以分子量、分子形状和水等情况来决定，其作为生物体大分子的一个特征是重要的。蛋白质的沉降系数大部分在1—20S这个范围。 ①差速离心：依据实际物系特点（目的物和其他组分性质和相互作用等）、分离目的和分离所需程度，调整离心力和时间，使得不同组分