【标准】中国药品检验标准操作规程2021版细菌内毒素检查法.docxVIP

细菌内毒素检查法 1 简述 1. 1 本规范适用于《中国药典》 2021 年版二部附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法——凝胶法和光度测定法；后者包括浊度法和显色基质法；供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验；当测定结果有 争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准； 1. 2 供试品细菌内毒素限值的确定 |精. |品. |可. |编. |辑. |学. |习. |资. |料. * | * | * | * | |欢. |迎. |下. |载. 1. 2. 1 药典中或国家标准有规定的，按供试品各论中规定限值； 1. 2. 2 尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值： L＝ K ∕ M 式中 L 为供试品的细菌内毒素限值，以 EU／ ml 、EU ／mg、EU ／ U 等表示； K 为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以 EU／ (kg ·h) 表示；其中注射剂， K ＝ 5EU／ (kg · h)；放射性药品注射剂， K ＝2. 5EU ／ (kg· h)；鞘内用药品， K ＝ 0. 2EU ／ (kg · h)； M 为人用每公斤体重每小时最大剂量，以 ml ／(kg· h)、mg／ (kg · h)、U／ (kg · h) 等表示； ２ ２药品人用最大剂量可依据药品使用说明书或参阅《临床用药须知》 ，中国人均体重按 60kg 运算，注射时间小于 1h 的按 1h 计；如供试品按体表面积给药，供试品每平方米体表面积剂量乘以 0. 027 即可转换为每千克体重剂量［即 M ：（最大给药剂量／ (m · h)× 1. 62m ）／ 60kg ］ ２ ２ 1. 3 供试品最大有效稀释倍数的确定 供试品的最大有效稀释倍数（ MVD ）按下式运算： MVD ＝ C· L ／λ L 为供试品的细菌内毒素限值，当 L 以 EU ／ ml 表示时， C 等于 1. 0ml ／m1 ；当 L 的单位以 EU ／ mg 或 EU ／ u 表示时， C 为供试品制备成溶液后的浓度，单位为 mg／ml 或 U／ ml； λ 在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度； 供试品如为无菌粉末或原料药，供试品最小有效稀释浓度（ MVC ）按下式运算： MVC ＝ λ ／ L； 4 药典或国家标准或其他内毒素检验标准中已有规定的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中显现干扰的情形需再进行干扰试验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰试验的研 究，确定限值和不干扰浓度后再进行内毒素检查； 试验材料及用具 1 天平供试品称量用，精度为 0. 1mg 以下； 2. 2 电热干燥箱用于去除外源性内毒素，温度应能达到 250℃； 2. 3 恒温水浴箱或相宜的恒温器（ 37℃± 1℃）； 2. 4 水银温度计或酒精温度计，精度在 1℃以下； 2. 5 旋涡混合器； 2. 6 鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号； 2. 7 细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品，除另有规定外，应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品； |精. |品. |可. |编. |辑. |学. |习. |资. |料. * | * | * | * | |欢. |迎. |下. |载. 2. 8 细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于 0. 015EU／ ml（用于凝胶法）或 0. 005EU ／ml （用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水； 2. 9 试验用具 移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头） 、凝集管（ 10mm× 75mm ）、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、封口膜、时钟、 75％乙醇棉、剪刀、砂轮；所用玻璃器皿须经 250℃干烤 30 分钟以上；如使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且 对试验无干扰的器械； 10 细菌内毒素光度测定仪器； 试验预备 1 玻璃器皿的洗涤 将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液控干，用自来水将残留洗液完全洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，控干后放入相宜的密闭 金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入电热干燥箱； 3. 2 玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素的去除 玻璃器皿置干燥箱后，将干燥箱调至 250℃， 待干燥箱温度升至设定的温度后开头计时， 250℃干烤 30 分钟以上；达到规定时间后，关断电源，待干 燥箱温度自然降至室温；在不打开金属容器的情形下，可在两天内使用；假如玻璃器皿用锡箔纸包装， 在不打开包装的情形下可在两周内使用，否就须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素；