厦门大学生物化学实验讲义.pdf

生物化学实验 厦门大学环境与生态学院 2016.2 实验室守则 1 实验记录及实验报告 2 实验一 淀粉的提取和水解 4 实验二 总糖与还原糖的测定 6 实验三 粗纤维的测定 9 实验四 酪蛋白的制备 12 实验五 粗脂肪的定量测定 V 氏提取法 14 实验六 蛋白质等电点测定 16 实验七 氨基酸的分离鉴定－纸层析法 18 实验八 蛋白质含量的测定 21 实验九 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 34 实验十 影响酶活性的因素 41 实验十一 碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定 45 实验十二 凝胶过滤层析纯化碱性磷酸酶 51 实验十三 DEAE-纤维素柱层析纯化碱性磷酸酶 51 实验十四 底物浓度对酶活力的影响（米氏常数的测定） 56 实验十五 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白 61 实验十六 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 69 实验十七 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量 74 实验十八 维生素 C的定量测定 79 实验十九 猪脾 DNA的制备 84 实验二十 DNA的定量测定 87 实验二十一 DNA的琼脂糖凝胶电泳 89 实验二十二 RNA的定量测定 92 实验二十三 肌糖原的酵解作用 94 实验二十四 茶叶多糖的提纯与鉴定 97 仪器的使用 99 附录 101 i 实验室守则 1、遵守课堂纪律，认真进行实验 每个学员应该自觉地遵守课堂纪律，维护课堂秩序，保持室内安静，不大声谈笑。实验过 程中 要听从教师指导，严格认真地按操作规程进行实验。并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验 记录本上，完成实 验后经教师检查同意，方可离开实验室、实验后要认真写好实验报告，由课代表 按期收交给教师，不无故拖延。 2、保持整洁 保持环境和仪器的整齐清洁是做好实验的重要条件，也是每个实验者必须养成的良好的工作习 惯。实验台面 和试剂药品架上都必须保持整洁，仪器药品放置要有次序，不要把试剂、药品洒在实 验台面和地上，废液应倒进水槽内 （强酸强碱必须都应倒入废品缸内，不可倒入水槽或随地乱扔。实验完毕需将仪器洗净收好，药品试剂排列整齐。注意保 持实验台面干净及实验室整齐清洁。 3、药品使用 使用药品试剂必须注意节约杜绝浪费， 要特别注意保持药品和试剂的纯净， 药品用后须立即将 瓶盖塞紧放回原 处，从瓶中取出的试剂，标准溶液等，如未用尽切勿倒回瓶内，避免混杂。 4、仪器使用 各种仪器用具均应注意爱护，细心使用，防止损坏，使用电子天平，分光光度计和离心机等贵 重精密仪器， 要严格遵守操作规程，发现故障立即报告教师，不要自己动手检修，要爱护国家财产， 厉行节约。 5、注意安全 为了有效地维护实验室安全，保证实验正常进行，要求： 1）要严格做到：火着人在，人走火灭； 2）勿使乙醚、丙酮、醇类等易燃液体接近火焰，蒸发或加热此类液体时，必须在水浴上进行， 切勿用直火加热； 3）凡比水轻且不与水相混溶之物（如醚、苯、汽油等）着火时，应迅速用湿毛巾覆盖火焰，以 隔绝空气使其熄灭， 绝不能倒水于其上，以免火焰蔓延，对于易与水混溶之物（如乙醇、丙酮等） 着火时，可用火扑灭之； 4）有不少药品是有毒或有腐蚀性的不可用手直接拿药品，不可将试剂瓶直接对准鼻子闻，更不 可尝药品味道。用移 液管吸取有毒试剂，强酸和强碱时，均应用洗耳球，严禁用口吸取； 5）离开实验室时，要关好水龙头，拉下电闸，认真负责地进行检查，严防不安全事故； 6）每次实验课由班长安排同学轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性 工作。 实验记录及实验报告 一、实验记录 实验课前应认真预习，将实验名称、目的和要求、原理、实验内容、操作方法和步骤等简单扼 要地写在预习 报告中。 实验中观察到的现象、结果和数据，应该及时地直接记在预习报告中，绝对不可