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嘌呤霉素筛选稳定表达细胞系经验总结
嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染细胞株,仅作参考)
(1)24孔板内以5~8 x 104?cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜;
(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);
(3)细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞;
(4)约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
(5)每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
(6)最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
嘌呤霉
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