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作业指导书 1 文件编号：
版本号/修订状态：
金黄色葡萄球菌的测定 页码/总页数：
实施日期：
一、编制目的
为规范检测单位对金黄色葡萄球菌检测的操作，编制本作业指导书。
二、适用范围
本指导书适用于公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌的测定。
三、编制依据
GB 18204.4-2013 《公共用品用具微生物 金黄色葡萄球菌平皿鉴定法》
四、设备和材料
4.1 恒温培养箱
4.2 电炉或微波炉。
4.3 恒温水浴箱
4.4 显微镜
4.5 天平
4.6 离心机
4.7 高压灭菌锅
4.8 无菌试管、平皿（直径 9cm）、刻度吸管等。
4.9PH 计或 PH 试纸。
4.10 载玻片
4.11 酒精灯
五、培养基和试剂
5.1 胰酪胨大豆肉汤
5.2 氯化钠肉汤（75g/L）
5.3Baird Parker 平板
5.4 血琼脂培养基
5.5 革兰氏染色液
六、操作步骤
6.1 采样方法见 GB18204.4-2013 附录 A
6.2 将 1m 样品放入 9m 氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基中，36℃培养 24h。
6.3 从培养液中取 1 接种环-2 接种环，划线接种在 Baird Parker 平板或用血琼脂培养基，
于 36℃培养 24h。在 Baird Parker 平板培养基上菌落为圆形、光滑、凸起湿润、颜色呈黑
灰色、边缘整齐、周围浑浊、外层有一透明带；在血琼脂平板上菌落呈圆形、金黄色、凸
起、表面光滑、周围有溶血圈。
6.4 挑取典型菌落作涂片染色镜检，为革兰氏阳性，呈葡萄状排列。
6.5 血浆凝固酶实验：吸取 1:4 新鲜血浆 0.5m 放入灭菌小试管中，再加入待测检菌 24h
肉汤培养物 0.5m 。混匀，放 36℃温箱或水浴锅中，每 30min 观察 1 次，24h 之内如呈现
凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5m ，
分别加入小试管内与 1:4 血浆 0.5m 混匀，作为对照。
七、结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，血浆凝
固酶实验阳性，可报告检出金黄色葡萄球菌。
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