结核杆菌特异性细胞免疫反应监测.6.5杨峻山科室讲课知识讲解.ppt

全球现有的三个IGRA产品 T.SPOT-TB 细胞IGRA； QuantiFERON TB Gold (in tube)：简称 QFT-IT 全血IGRA； 尚未获得中国SFDA批准进入中国； A.TB：国内第一家 全血IGRA； 结核杆菌特异性细胞免疫反应检测 2011年7月6日，获中华人民共和国食品药品监督管理局（SFDA）批准上市 生 产 企 业： 海口维瑅瑷生物研究院 注 册 号： 国食药监械（准）字2011第3400801； 产品标准编号： YZB/国 2442-2011， 项 目 类 别： 体外三类诊断试剂 原理与技术背景 γ-干扰素释放实验（IGRA） （IGRA，interferon- gamma release assay） 酶联免疫技术（ELISA） （ELISA，Enzyme-Linked ImmunoAssay） 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） （culture filtrate protein 10 ） 基本原理1 机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异性抗原刺激时会释放γ-干扰素，通过对 γ-干扰素的定量分析可判断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。 γ-干扰素释放实验（IGRA） Proteosome 蛋白酶体 exocytosis ?-干扰素 结核杆菌特异性T细胞 抗原呈递细胞 脱毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用 LFnESAT6 / LFnCFP10 产品特点 2 高灵敏度 ○ 结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影像学表现； ○ 无需带菌标本，适用于“菌阴肺结核”及“肺外结核” 的鉴别 ○ 受个体免疫功能低下影响小； 高特异性 不受卡介苗与绝大多数环境非结核分枝杆菌影响 安全快速 只需患者提供 3ml 静脉全血，次日可出报告 A.TB临床性能指标 国内临床数据——1085 例样本 ● 试验组 472 例： 菌阳结核 菌阴结核 ● 对照组 613 例： 健康志愿者 非结核其它肺部疾病 临床诊断性能 诊断性能指标 结果（95%CI） 敏感性 83.3%[79.9%-86.7%] 特异性 85.6%[82.8%-88.4%] 准确度 84.6%[82.5%-86.7%] 阳性预测值 81.7%[78.2%-85.2%] 阴性预测值 86.9%[84.2%-89.6%] 阳性似然比 5.8[4.8-7.1] 阴性似然比 0.2[0.16-0.24] 疾病类型 例数 A.TB 阳性 阴性 艾滋病感染者合并活动性结核 8 8(100%) 0(0%) 糖尿病合并活动性结核 13 12(92.3%) 1(7.7%) 类风湿合并活动性结核 5 4(80%) 1(20%) 结核性胸膜炎同时服用免疫抑制剂 9 7(77.8%) 2(22.2%) 合 计 35 31(88.6%) 4(11.4%) A.TB临床诊断数据-2 样本要求 新鲜采集的肝素钠抗凝全血 每份样本不得少于3 ml 样本常温（15-25℃）保存，不得冷冻或冷藏 样本采集后 16 小时内进行前处理（抗原刺激） A.TBTM 操作过程 阴性 刺激剂 阳性 刺激剂 A.TB 刺激剂 样本采集：3ml新鲜全血，肝素钠抗凝 37 ℃ 16小时内运输 常温 22-24小时 血浆收获 标准曲线制备、 样品检测 450nm读数 37 ℃ 第一步：样本的刺激 第二步：ELISA定量IFN-γ N P T N P T 0.5小时 约3小时 样本的刺激和孵育 A.TBTM 报告单 姓名 年龄 性别 ID号 科别 诊断 样本 样本号 检测项目 测定结果 单位 计算公式 T/P 参考范围 提示 混合淋巴细胞培养 + 干扰素（P） 9.86 IU/ml 0.24 ＜ 0.6 阴性（-） 混合淋巴细胞培养 + 干扰素（T） 2.34 IU/ml 备注： 患