293T细胞培养标准操作规程.pdfVIP

百利药业生物药研发部 编号：SOP-M-e-00- 百利药业生物药研发部 标 准 操 作 规 程 题目：293T细胞传代培养操作规程 编号：SOP-M-e-003- 制定者： （签名） 日期： 年 月 日 批准者： （签名） 日期： 年 月 日 生效日期： 年 月 日 修改和追加记录 序号 日 内容摘要 签名 1 2 3 4 5 6 第1页 共3页 百利药业生物药研发部 编号：SOP-M-e-00- 题目：293T细胞培养操作规程 1 目的 293T 细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞，因此做好 293T 细胞的培 养，为保证相关实验的正常进行提供必要条件。 2 适用范围 本部门293T细胞培养 3 操作方法 2 3.1 将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75c 新的细胞培养瓶放于生物安全 柜中，按照生物安全柜的标准操作规程，将生物安全柜的紫外开启半小时。 3.2 将含 10%胎牛血清和100U/ml双抗的DMEM及PBS放于37℃水浴锅中预热。 3.2.1 将已长到 80%-90%的293T 细胞培养瓶从 37℃，5%的CO 培养箱中取出，先用 2 75%的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中，用无菌的移液管吸净 其中的培养基，加5ml的预热的PBS洗涤一次，吸净PBS。 2 3.2.2 将含EDTA-0.25%tyption用PBS稀释两陪到五倍，向该75c 的细胞瓶中加入3ml 稀释好的 EDTA-0.25%tyption，让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放在显 微镜下观察，直到细胞变圆，加含 10%胎牛血清的DMEM终止反应，用移液管轻轻将 瓶上的细胞吹下，将细胞液移到 15ml无菌的离心管中，1000rp 离心3分钟。 3.2.3 将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释开，取一定量的细胞液进行n倍稀释后计数，按照细胞计 数标准操作规程进行。 4 2 2 3.2.4 计数好之后细胞传代密度按照2~5×10 个细胞/c 进行传代培养，每个75c 的 培养瓶中加10mlDMEM培养基，放于37℃，5%的CO 培养箱中培养。 2 3.2.524小时后观察细胞状态，待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。 第2页 3页