样品分析实验方法pcr dgge.pptxVIP

DGGE ;原理;三个部分;;DNA提取;核酸抽提：去除杂蛋白。 一般用一般用酚- 氯仿- 异戊醇抽提 。最后 用乙醇洗涤，得到相对较纯的DNA。 一般抽提DNA之后做一次琼脂糖凝胶电泳，检查是否得到了DNA。;PCR;PCR过程;16SrRNA基因的PCR;配制PCR反应体系;PCR反应程序（PCR仪);琼脂糖凝胶电泳;电泳槽;一张琼脂糖凝胶电泳图;变性梯度凝胶电泳;;;;DGGE电泳;染色，照胶;染色法的优缺点;两张DGGE电泳图片;附： DGGE 操作步骤 1. 将海绵垫固定在制胶架上，把类似‘三明治’结构的制胶板系统垂直放在海绵上方，用 分布在制胶架两侧的偏心轮固定好制胶板系统，注意一定是短玻璃的一面正对着自己。 2. 共有三根聚乙烯细管，其中两根较长的为 15.5cm，短的那根长 9cm。将短的那根与 Y形管相连，两根长的则与小套管相连，并连在 30ml 的注射器上。 3. 在两个注射器上分别标记‘高浓度’与‘低浓度’ ，并安装上相关的配件，调整梯度传送系统的刻度到适当的位置! 4. 反时针方向旋转凸轮到起始位置。为设置理想的传送体积，旋松体积调整旋纽。将体积设置显示装置固定在注射器上并调整到目标体积设置，旋紧体积调整旋纽。例如16*16cm gels(1mm thick)：设体积调整装置到 14.5。;5. 配制两种变性浓度的丙烯酰胺溶液到两个离心管中