血红蛋白的提取和分离-文档资料.pptVIP

;1.分离生物大分子的基本思路：;基础知识;基础知识;4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程;凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示;（二）缓冲溶液;（二）缓冲溶液; （三） 电泳：;影响蛋白质分子运动速度的因素;; 聚丙烯酰胺凝胶电泳; 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。;用SDS测定蛋白质分子量的方法;电泳检测结果; 实验操作;血液;血红蛋白;(1)红细胞的洗涤:;(2)血红蛋白的释放：;(3)分离血红蛋白溶液：;甲苯层（无色透明） ;(4)透 析：;透析??程动画演示;利用透析袋透析;2.凝胶色谱操作:;（2）凝胶色谱柱的装填;③凝胶色谱柱的装填方法： A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱 内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀 注意： 1、装填时尽量紧密：降低凝胶颗粒之间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。; ;（3）样品加入与洗脱;（3）样品加入与洗脱;收集得到的纯化后的蛋白;思考下面的问题：; 观察处理的血液样品离心后是否分层，如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。 此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白