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课题3血红蛋白的提取与分离自制会计学一、基础知识(一）蛋白质1、含量占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物2、组成元素C、H、O、N3、相对分子质量高分子化合物HRCCOOHNH24、基本组成单位氨基酸5、氨基酸通式写出氨基酸脱水缩合形成二肽示意图6、氨基酸连接方式脱水缩合氨基酸的结合方式HHOHCCOOHCCOOHNH2NH2CNOHHR2R1HHCCOOHNR2氨基酸的结合方式HOCNH2COHHR1H2OHHCCOOHNR2氨基酸的结合方式:脱水缩合HO二肽CNH2C肽键R1H2OHHOHHHOCCCOOHCNNCCNH2R2R1R3氨基酸的结合方式:脱水缩合OHH肽键二肽H2OH2OHHOHHHOCCCOOHCNNCCNH2R2R1R3氨基酸的结合方式:脱水缩合三肽肽键肽键二肽H2OH2O以此类推，由多个氨基酸分子缩合而成的含有多个肽键的化合物，叫多肽（链状）。肽链盘曲，折叠，形成有一定空间结构的蛋白质分子。NHCO脱水缩合盘曲折叠氨基酸肽链蛋白质（一条或者多条）7、肽键8、分子结构9、蛋白质结构的多样性氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别10、生理功能细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者11、相关计算①氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基，另一端只有一个羧基（不计R基上的氨基和羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨基和羧基都是一个②若有个n氨基酸分子缩和成m条肽链,则可形成________个肽键,脱去______个水分子，至有氨基和 羧基各 ____个n - mn - mm③蛋白质可以含有一条或n条肽链、肽链通过化学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结构④关于蛋白质相对分子量的计算： n 个氨基酸形成m条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为a,那么由此形成的蛋白质的相对分子量为______________n ·a - (n - m) ·18课题3血红蛋白的提取和分离思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异分子的形状和大小所带电荷的性质和多少分离不同蛋白质溶解度思考3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构思考4 人们用鸡的红细胞提取DNA，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。 一、凝胶色谱法原理什么是凝胶？一些微小多孔的球体内含许多贯穿的通道，由多糖类化合物构成的如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛当不同的蛋白质通过凝胶时原理：相对分子质量较小相对分子质量较大容易进入无法进入凝胶内部的通道凝胶内部的通道只能在凝胶外部移动路程较长移动速度较慢路程较短移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。1－2 调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。使用比例在不同PH范围内(1)0.2 mol/L的Na2HPO4溶液 将71.64 g的Na2HPO4·12H2O溶解在1 000 mL的蒸馏水中 (2)0.2 mol/L的NaH2PO4溶液 将31.21 g的NaH2PO4·2H2O溶解在1 000 mL的蒸馏水中 pHpH5.86.06.26.46.66.88.012.318.526.537.549.092.087.781.573.562.551.07.07.27.47.67.88.061.072.081.087.091.594.739.028.019.013.08.55.30.2 mol/L0.2 mol/L0.2 mol/L0.2 mol/LNa2HPO4/mLNaH2PO4/mLNa2HPO4/mLNaH2PO4/mL思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）二、电泳的原理概念：指带电粒子在电场作用下发生 迁移的过程。带电性质的差异待分离样品中各种分子带电分子产生不同的迁移速度大小、形状的不同 1、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 等因素。它所带静电荷的多少以及分子的大小十二烷基硫酸钠2、SDS：为了消除静电荷对迁移率的影响SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SD