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细菌培养及菌体收集 细菌培养及菌体收集 PAGE 细菌培养及菌体收集 基因工程实验流程参考图： 碱变性法提取质粒DNA序列比对以及系统发育树的建立阳性克隆送样测序质粒DNA酶切验证阳性克隆筛选转化感受态制备PCR产物纯化细菌基因组DNA的16srRNA片段PCR扩增细菌基因组DNA的电泳鉴定细菌基因组DNA的提取 碱变性法提取质粒DNA 序列比对以及系统发育树的建立 阳性克隆送样测序 质粒DNA酶切验证 阳性克隆筛选 转化 感受态制备 PCR产物纯化 细菌基因组DNA的16srRNA片段PCR扩增 细菌基因组DNA的电泳鉴定 细菌基因组DNA的提取 与pMD18-T载体的连接 与pMD18-T载体的连接 确定菌株分类地位 确定菌株分类地位 细菌培养及菌体收集　 挑取单菌落于5 ml 2216E培养基中，8℃培养， 100 rpm转速，振荡120 h后，12 000 rpm离心15 min。弃去上清液，加入10 ml TE洗涤离心后，用10 ml TE溶解菌体，混匀，–20℃ 保存备用。 实验一：菌株基因组DNA的提取 （CTAB 方法） CTAB/NaCL溶液配制：CTAB/NaCL溶液(10% CTAB， NaCL? 溶于80ml水中，缓慢加入10gCTAB，加热溶解)； 原理：采用溶菌酶破碎细菌细胞壁，加入去污剂CTAB和EDTA消化细胞，可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂