一种检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物及应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 111363860 A (43)申请公布日 2020.07.03 (21)申请号 202010458590.8 (22)申请日 2020.05.27 (71)申请人 吴江近岸蛋白质科技有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济开发 区科技创业园综合楼 (72)发明人 王笃强　位小丫　赵曼曼　李瑞霞　 郑实　 (74)专利代理机构 苏州衡创知识产权代理事务 所(普通合伙) 32329 代理人 张芹 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 序列表10页 附图3页 (54)发明名称 一种检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组 合物及应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测新型冠状病毒 COVID-19的核酸组合物及应用，先基于转录介导 的扩增技术（TMA）进行核酸样本扩大，再联合 CRISPR-Cas13a蛋白酶的“连带切割”的活性进行 特异性地检测扩大后的病毒靶标核酸。向含有待 检靶标核酸的反应体系中加入sgRNA、Cas13a蛋 白、ssRNA信号报告探针和反应缓冲液，反应进行 时对其信号读取检测，进而得以检测目的基因。 使用本发明的方法可快速检测样品中是否含有 靶标核酸序列，且与转录介导的核酸扩增技术的 结合，使得该检测方法的灵敏度可以达到纳摩尔 A 级，可适用于快速检测病原微生物、基因突变和 0 特异靶标RNA等。 6 8 3 6 3 1 1 1 N C CN 111363860 A 权　利　要　求　书 1/2 页 1.一种检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物，其特征在于，包括根据新型冠状病 毒COVID-19的N基因序列设计的引物对N-t7F和N-R、以及根据新型冠状病毒COVID-19的 Orf1ab基因序列设计的引物对Orf1ab-t7F和Orf1ab-R，所述N基因的序列如SEQ  ID NO:1所 示，所述Orf1ab基因的序列如SEQ  ID NO:2所示；所述引物对N-t7F和N-R的序列如SEQ  ID  NO:3和SEQ  ID NO:4所示，所述引物对Orf1ab-t7F和Orf1ab-R的序列如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:6所示。 2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物，其特征在于，还包 括RNA核酸探针，所述RNA核酸探针为化学合成的两端进行荧光标记修饰的ssRNA核酸探针， 所述ssRNA核酸探针的序列如SEQ  ID NO:9所示，所述ssRNA核酸探针在5’端标记有荧光报 告基团，在3’端标记有荧光淬灭基团。 3.根据权利要求2所述的检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物，其特征在于，所述 荧光报告基团选自HEX、Cy5、FAM、ROX中的一种，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ3、TAMRA中 的一种。 4.一种检测新型冠状病毒COVID-19的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如权利 要求1-3任一所述的检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物。 5.一种非疾病诊断目的的检测新型冠状病毒COVID-19核酸的方法，其特征在于，包括 以