荧光定量PCR在临床医学中的应用.ppt

解脲支原体 UU难以分离，需特殊培养基培养，操作费时，需1-3天才能得到初步结果。 血清学检查，仅10%UU尿道炎患者在病程中特异性抗体滴度升高4倍，使其方法学应用受限。 一些非致病的脲原体或培养过程中的污染都可能导致假阳性的结果。 传统方法检测解脲支原体的缺陷 具有高度的敏感性和特异性，提高阳性检出率 快速、定量准确，可以为临床评价疗效提供依据 荧光定量PCR检测支原体的优势 CT、UU是美国FDA批准的PCR检测试剂盒，作为首选方法，在临床推广应用 人类乳头瘤病毒 有100多个型 只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，人是HPV的惟一宿主 免疫原性低，易形成持续性感染 新生儿产道感染 HPV 宫颈癌 传统巴氏涂片漏诊率可达30% 从细胞学水平来观察细胞的形态学改变，其中80%的患者确诊时已是宫颈癌晚期 传统方法检测HPV的缺陷 早期感染的病原检测 可对HPV进行分型 可以评估病毒载量与患癌症风险 可以考核疗效与预后 用于HPV感染与生殖器肿瘤相关性的研究 荧光定量PCR检测HPV的优势 人类免疫缺陷病毒 是引起艾滋病的病原体 可判定无症状且血清阴性患者潜在的HIV传播性 检测长潜伏期的HIV携带者 使“窗口期”缩短10天 在治疗过程中观察患者血清HIV载量的变化预示病情的转归和指导临床用药 对于新生儿是否从母体感染HIV的诊断尤为适用 荧光定量PCR检测HIV 小结 荧光定量PCR是特异、灵敏、高效的基因诊断技术 对致病微生物核酸含量进行定量检测 弥补免疫检测的缺陷（如HCV） 缩短诊断的窗口期（如HIV），利于早期诊断 对治疗过程进行疗效监测 指导用药过程及剂量，以制定合理的疗效方案 定量PCR的临床应用可结合临床表现，并与传统的免疫学、影像学等诊断方法来综合评判，更为科学 小结 04年6月，卫生部临检中心主任申子瑜、中国医科大学附属一院副院长尚红等专家对迪安医学检验中心的PCR基因诊断实验室进行验收，并顺利通过！ 谢 谢 大 家 ！ * * HBV DNA检测的临床意义 HBV DNA是HBV存在最直接的依据 HBV DNA是HBV复制的标志 HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎 　　 提供直接证据缩短“窗口期” 　PCR检测 “窗口期” 核酸检测缩短的“窗口期”的天数 HBV 56 6-15 HCV 70 41-60 HIV 22 10-15 有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断 HBV DNA检测的临床意义 HBV DNA检测的临床意义 调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。 HBV DNA检测方法 斑点杂交（基本淘汰） 定性PCR（基本淘汰） 荧光定量PCR（主流） 基因芯片（将来？） 为什么建议病人要进行HBV DNA检测？ 荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期 血清标本 Copies/ml HBeAg阳性慢性乙型肝炎病人 8.3 x 108 经α干扰素治疗后HBeAg转阴 6.2 x 103 非活动性HBsAg携带者血清 5.6 x 103 原先血中HBV DNA阳性，已痊愈超过12个月的血清 103 HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？ 干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。 PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。 病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。 乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类： ?干扰素：重组人α-1b干扰素、α- 2a、 α-2b干扰素等。 核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。 乙肝的治疗 主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等 对于HBV DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗 拉米夫定 可迅速降低HBV DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻断肝纤维化的进程，终止肝硬化的发展。 尤其是拉米夫定不受病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。 此外拉米夫定还能抑制肝移植受体和AIDS病人体内的HBV复制。 拉米夫定治疗人群 有明显HBV DNA复制者 前C区变异的慢性乙型肝炎 代偿期的慢性乙型肝炎 接