苛养菌的分离培养.pptVIP

苛养菌的分离培养及鉴定方法;何为苛养菌？;血平板培养基;A嗜血杆菌属; 流感杆菌(Hemophilus influenzae)是人类上呼吸道的正常菌群，以往一直被误认为是流行性感冒的病原菌，但实际致病范围极广，除引起呼吸道病变外，尚可引起脑膜炎、败血症、结膜炎、女性生殖道感染、蜂窝织炎等。不仅是婴幼儿感染的常见致病菌，亦是成人感染的病原菌之一。;1.形态与染色 流感嗜血杆菌是一群无动力、无芽孢、呈球杆状或多形态的革兰阴性小杆菌。菌落为圆形、无色、透明。 2.培养特性 需氧或兼性厌氧，培养时需要X因子和V因子。血液中因x子经加热可释放，故常用巧克力色培养基分离培养。另外金黄色葡萄球菌生长时能产生本菌需要的V因子，; 因此与金黄色葡萄球菌共同培养时，离金黄色葡萄球菌菌落近的生长好，形成卫星现象。副流感只需V因子，杜克氏只需X因子。? 该菌的药敏实验???HTM平板 ;3.致病物质和所致疾病 致病物质主要为荚膜、菌毛与内毒素。根据荚膜多糖，b型致病力最强。所致疾病分原发感染和继发感染两类，前者为急性化脓性感染，后者常在流感、麻疹等感染后发生，临床有慢性支气管炎、中耳炎、鼻窦炎等，多见于成人。;于1930年，流感嗜血杆菌分类为两类，即荚膜菌株及没有荚膜的菌株。虽然已知荚膜类的乙型流感嗜血杆菌是毒性的主因之一，但感染流感嗜血杆菌的病因仍未完全清楚。它们的荚膜能帮助它们抵抗在没有免疫的寄主体内的吞噬作用及不触发补体介导的裂解。没有荚膜的菌株则较少侵略，但它们能诱发炎症而产生其他病症，如会咽炎。;病源菌根据不同的生化反应可分为6个生物型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。致病者多为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。根据荚膜多糖抗原性不同，可将有荚膜菌分为a、b、c、d、e和f6个血清型。b型致病力最强，其次为e和f。根据细菌外膜蛋白（OMP）又可分为不同的亚型。有荚膜者致病力大于无荚膜者。 ;流感杆菌主要通过呼吸道在人与人之间传播，也可通过孕妇产道感染。新生儿由于有来自母体的被动免疫，故2个月内发病率低，3个月至3岁儿童的血清抗体水平最低，此期易产生感染;杜克雷嗜血杆菌;从病灶中或培养菌落中取材检查可见2个或2个以上细菌连成锁状有如鱼群在游泳。故称鱼群状。在淋巴腺组织切片中可见典型的连锁杆菌。;杜克雷嗜血杆菌对温度较敏感，43-44℃以上温度则失去抵抗能力，20分钟即可死亡。对42℃抵抗性稍强，但4小时死亡。在37℃中可活6-8天，10-20℃之间7-10天后可死亡，在此温度中较大肠菌、葡萄球菌抵抗力弱，较淋球菌强，对寒冷抵抗力较强，5℃中可生存1周，冻干时可能生存1年。对干燥的抵抗性弱。在人工培养中温度是发育的重要因素。 ;在19世纪以前人们把梅毒与软性下疳混为一谈。直到1889年，意大利皮肤病学家杜克雷从3例患有生殖器溃疡的病人患部取脓性分泌物，接种到自己身上，并形成了溃疡。他在自身患部排出的脓性分泌物中发现一种微生物，这种微生物特别喜欢在含有新鲜的人血或兔血的培养基上生长，所以被称之为杜克雷氏嗜血杆菌。就是以后证实的软性下疳致病菌。;杜克雷嗜血杆菌对X因子需要性高，不需要V因子，将纯培养物注射入家兔可引起面部溃疡性病灶，人感染后，不能产生持久免疫力。;B肺炎链球菌; 2.培养特性和生化反应 营养要求及在血平板上菌落特征基本同甲型链球菌，培养时间稍久菌落中央下陷呈脐窝状，在血清肉汤中培养稍久亦因细菌自溶而使浑浊的培养液变澄清， 自溶酶可被胆汁或胆盐等物质活化，加速细菌溶解，故可用胆汁溶菌试验与甲型链球菌相区别。 ? 该菌通过optochin敏感实验得到鉴定。; 该菌的药敏实验平板为血MH平板，放CO2环境 **1ug苯唑西林纸片可用来筛选P耐药，但须认识到，当OX20mm时表明肺炎链球菌对P敏感，此菌往往也对其他B-内酰胺（包括阿莫西林和多数头孢素）抗生素敏感；如果OX19，则需要重新检测青霉素、头孢霉素MIC，以确认该菌株是否是耐药。 许多药物还没有药敏试验的解释标准，不能够提供准确的、令人满意的一些重要抗生素（如超广谱头孢、碳青霉烯）的药敏试验结果。;3.致病性;C链球菌;2.链球菌的生化反应 链球菌在普通培养基上生长不良 a.杆菌肽敏感试验：A群溶血性链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他群链球菌通常耐受，故此试验可对链球菌进行鉴别。 b.CAMP试验：下血平板上B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，可促进金黄色葡萄球b溶血素活性。;3.致病性 链球菌广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，可引起人类多种疾患，A 族占90%以上，猩红热，丹毒，新生儿败血症，脑膜炎，产引起各种化脓性炎症，褥热以及链球菌变态反应性疾病等。;D奈瑟氏菌;1.形态与染色 本属细菌为革兰染色阴性，球形或球杆形。 球菌多呈双球菌状排列，相邻一侧扁平或略凹呈肾状；杆菌