家畜传染病绪论 .ppt

目前可以在因特网Gertbank中检索到大部分病原微生物的特异性核酸序列。PCR技术就是根据已知病原微生物特异性核酸序列，设计合成与其5，端同源，3，端互补的二条引物。在体外反应管中加入待检的病原微生物核酸(称为模板DNA)，引物，dNTP和具有热稳定性的DNATaq聚合酶，在适当条件下(Mg”离子，pH等)，置于自动化热循环仪(PCR仪)，经过变性、复性、延伸，三种反应温度为一个循环，进行20—30次循环。如果待检的病原微生物核酸与引物上的碱基匹配的话，合成的核酸产物就会以Zn(n为循环次数)呈指数递增。产物经琼脂糖凝胶电泳，可见到预期大小的DNA条带出现，就可做出确切诊断。PCR技术具高度敏感性，可从106个细胞中检出一个被病毒感染的细胞。马立克氏病毒MDV感染鸡的第5天就可从血液中检出MDV病毒核酸。微量PCR的敏感性可达0．1PsDNA量。PCR诊断方法具高度特异性，如用PCR方法可将MDV致瘤毒株与非致瘤毒株区分开来，这是一般诊断方法难以办到的。PCR方法也简便、快速，并建立了反转录PCR(RT-PCR)，套式PCR(NestedPCR)，毛细管PCR等多种PCR方法。目前报道用PCR检测的传染病很多，如口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、鸡白血病、马立克氏病、禽流感、新城疫、鸡、猪的支原体感染、鸡传染性贫血等，已广泛应用。只要知道病原微生物特异的核酸序列，就可用PCR方法检测。 * ppt课件 (2)核酸探针技术：核酸探针又称为基因探针，核酸分子杂交技术。该方法有三大组成部分：①待检核酸(模板)；②固相载体(NC硝酸纤维膜或尼龙膜)；③用同位素、酶、荧光标记的核酸探针。 核酸探针技术有：原位杂交(直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交反应)；斑点杂交(将待检的核酸或细胞裂解物，经过变性后直接点在固相膜上)；southern杂交(将待检DNA，经内切酶消化，琼脂糖凝胶电泳，变性后转到固相膜上)northern杂交，方法与southern杂交基本相同，但待检的是RNA。探针材料是取自已知的病原微生物核酸片段，DNA或cDNA文库中核酸片段，或者根据已知病原微生物核酸序列，设计人工合成特异的寡核酸片段，总之探针核酸是已知的。然后标记上同位素、地高辛、生物素等制备成探针。模板核酸与探针经过变性、复性、碱基配对原则，如果模板核酸与探针核酸同源则二者结合，否则不反应(与抗原抗体反应很类似)。利用酶底物反应或放射自显影方法，在固相膜的相应位置可见预期条带，可做出准确诊断。基因探针方法敏感性高，检测一个单基因仅需10?拷贝。单抗则至少需要10?抗原分子。能检测出低至10?13g DNA。该法特异性强，可以从混合标本中正确鉴定出目的病原微生物。该法简便快速。一个标本中同时可检出几种基因 * ppt课件 探针诊断应用范围： ①可对病毒、细菌、支原体、立克次体、寄生虫、原虫等致病原都能作出快速准确诊断。 ②在混有大量杂菌或混合感染物中直接检出主要致病原。包括难以在体外培养的病原。 ③检出带菌、带毒隐性感染的动物。 ④可对病原微生物进行准确分类鉴定。 ⑤可对动物产品或食品进行卫生检验。 * ppt课件 3)DNA芯片技术：该项技术在兽医传染病的诊断上还未见报道。但在人医的传染病诊断上已有研究报道。 DNA芯片技术是在核酸杂交，测序的基础上发展起来的，与southerm杂交，northern杂交同出一个原理，即DNA碱基配对和序列互补原理。DNA芯片又称为微排列属于生物芯片的一种。该项技术应用成熟的照相平板印刷术和固相合成，在玻片(硅片、聚丙烯、尼龙膜等固相支持物)的精确部位合成千百万个高分辨率的不同化合物制成的探针。在上面进行杂交，而不是传统的凝胶电泳杂交。片上单个探针密度为10?-10?分子／片。荧光标记杂交检测共聚焦荧光显微镜进行激光扫描、数据荧光图像由计算机处理软件分析，做出快速诊断。DNA芯片技术可用于鉴定靶序列、基因突变检测、基因表达监控、新基因发现、遗传制图等。根据微排列上探针不同，DNA芯片又分为寡核苷酸芯片和cDNA芯片。 目前已有筛选检测HIV病毒蛋白酶基因和反转录酶基因突变的DNA芯片商品。金黄色葡萄球菌、白色念球菌DNA芯片也已问世。 * ppt课件 第三节 检 疫 动物检疫是遵照国家法律，运用强制性手段和科学技术方法预防和阻断动物疾病的发生，以及疾病从一个地区向另一个地区间的传播。动物检疫的目的是：一是保护农、林、牧、渔业生 产。消除国际上重大疫情的灾害性影响，二是促进经济贸易的发展，优质、健康的动物和产品是保证国际间动物及动物产品贸易畅通无阻的关键。三是保护人民身体健康。动物及其产品不仅与畜牧业紧密相关，而且与人民生活密切