血凝(HA)和血凝抑制试验(HI).ppt

. 血凝（HA）和血凝抑制试验（HI） 主要内容 一、基本概念 二、HA和HI实验在禽病诊断中的作用 三、基本操作 四、注意事项 一、基本概念 1、血凝试验(HA) 1.1 定义 某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HA) 。 常见于正粘病毒（如AIV）、副粘病毒（如NDV）和某些黄病毒（如JEV）、痘病毒、以及经过处理过后的IBV。 1.2 血凝类型： (1) 可逆转型　 血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的血凝素后，可再与该血凝素发生凝集。 如天花、鼠疫等病毒。 (2) 不可逆转型　 血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特殊处理血凝素不能与病毒颗粒分开，这种病毒引起的红细胞凝集，是不可逆转的。在一定的温度 (37℃)下，病毒释放出一种能破坏红细胞表面受体糖苷键的N-乙酰神经氨酸酶，当病毒颗粒从红细胞表面游离出来后红细胞表面受体已被破坏而失去了再凝集病毒的能力。 如流感病毒、鸡新城疫病毒等。? (3) 凝集条件严格型　 有些病毒及其血凝素凝集红细胞的条件很严格，不仅对不同种动物的红细胞有严格的选择，即是对同种动物，由于性别和年龄的不同，对红细胞的凝集性能亦有差异（如JEV对公鹅的红细胞凝集性能比对经产老龄母鹅的红细胞凝集性能好） 。除此之处，还对缓冲液的pH值、温度及盐浓度等的要求均很严格。 1.3 原理 血凝的原理因不同的病毒而有所不同,如: 痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本身，而是痘病毒的产物--类脂蛋白的作用。 流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。 2、血凝抑制试验(HI) 2.1定义 当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 2.2原理 特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。 二、HA和HI实验在禽病诊断中的作用 1、用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定 根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。 2、HI试验可用于发病禽群的诊断 鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊断禽群是否患有新城疫或禽流感等。  3、对禽群的免疫状态进行评价 禽群或个体血清中的HI抗体水平与疫苗的免疫和对相应强毒侵袭的抵抗力都有密切关系。以新城疫为例，当HI抗体在7Log2以上进行活苗免疫时，由于高抗体可中和绝大部分的疫苗病毒，产生的免疫力很弱；HI抗体在5Log2～6Log2时，活苗免疫效果也受到一定的干扰；当HI抗体在4Log2以下时，活苗免疫效果良好，但对强毒感染抵抗力下降。一般认为，成年鸡新城疫的HI抗体水平在5Log2以上时，保护率在90％以上，4Log2以