Elisa实验报告分析和总结.pdfVIP

Elisa 实验报告 实验名称： 酶联免疫吸附剂测定 实验原理： 酶联免疫吸附测定是一种免疫测定技术。测定中，先使抗原吸附在固相载体上，然后加 待测的抗体，再用某种酶标记抗体，形成抗原 - 抗体 - 酶标记抗体的“双抗体夹心” ，此时酶 仍保有活性，同时标记抗体亦有免疫活性。之后再加入酶的底物，在酶的催化下产生反应 并产生有色物，颜色深浅与待测物质的量直接相关。至此，酶的催化放大作用与免疫反应 的特异性相完美结合，提高了测定的准确性与灵敏度。 实验材料与试剂： 1．聚苯乙烯微量细胞培养板 ( 平板 , 96 孔) 。 2 ．酶联免疫检测仪。 3．辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG。 4 ．包被液： 0.05 mol/L 碳酸缓冲液（ pH 9.6 ）： Na2CO3 0.15g, NaHCO3 0.293g， 蒸馏水稀释至 100 ml 。 5．稀释液（ PBS-Tween）： NaCl 8g, KCl 0.2g ， KH2PO4 0.2g, Na2HPO4·12H2O 2.9g, Tween-20，0.5ml ， 蒸馏水加至 1000ml。 6 ．洗涤液：同稀释液。 7．封闭液： 0.5 % （质量分数）BSA （用PBS配制）。 8．邻苯二胺溶液 ( 底物 ) ： 配制： 0.1 mol/L 柠檬酸 (2.1g/100ml), 取 6.1ml ， 0.2 mol/L Na2HPO4 ·12H2O (7.163g/100ml), 取 6.4ml, 加蒸馏水 12.5ml, 取邻苯二胺 8mg （溶解）； 临用前加 30 % （体积分数）H2O2 40 μl 。 9．终止液： 2 mol/L H2SO4 。 实验步骤： １．包被抗原： 用包被液将抗原作适当稀释 , 一般为 1~10μg/ 孔，每孔加 200 μl, 37 ℃ 温育 30min 。 ２．洗涤：倒尽板孔中液体， 加 200 μl 洗涤液，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上， 使孔中洗涤液流尽。 ３．加封闭液 200 μl ，37 ℃温育 30min。 ４．洗涤同 2 。 ５．加被检血清： 用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔 200 μl 。同时作稀释液对照。 37 ℃温育 30min。 ６．洗涤同 2 。 ７．加辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG, 每孔 200 μl, 37 ℃温育 30min。 ８．洗涤同 2 。 ９．加底物：邻苯二胺溶液加 200 μl ，室温暗处 5min 。 １０．加终止液：每孔 50 μl 。 １１．观察结果：用酶联免疫检测仪记录 OD490nm读数。 实验结果 数据如下： 血清稀释 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 1/25600 1/51200 无 1 抗 无抗原 倍数 (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11) 样 本 号 组号) 1.408 1.240 1.211 1.228 1.114 0.810 0.698 0.519 0.374 0.094 1.098 1.357 0.943 0.996 1.019 0.895 0.682 0.415 0.201 0.067 1.494 1.354 1.240 1.334 1.118 0.859 0.667 0.472 0.281 0.083 组平均 1.333 1.317 1.131 1.186 1.084 0.854 0.682 0.419 0.285 0.175