人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建（医学资料）.doc

人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建（医学资料） 文档信息 主题： 关于“医学心理学”中“肿瘤学”的参考范文。 属性： F-01L5PX，doc格式，正文32096字。质优实惠，欢迎下载！ 适用： 作为医学资料、医学资料写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建 2 0 引言 3 1 材料和方法 3 2 结果 5 3 讨论 6 文2：从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌 7 1材料和方法 7 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建（医学资料） 文1：人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建 摘1：:目的利用噬菌体表面展示技术，构建人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库.方法从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总RNA，反转录成cDNA后，用PCR扩增人IgG1Fd段及κ轻链，并克隆至噬菌粒载体pCOMB3中，转化宿主菌株XL1-Blue，以辅助噬菌体M13K07超感染噬菌粒文库，构建成人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库.结果得到一个含克隆数为×106，实际滴度约为×1015pfu#12539;L-1的IgG1Fab片段的噬菌体表面展示文库.结论IgG1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建，为下一步利用亲和富集筛选技术，获得具有胃癌表面抗原结合活性的融合抗体及可溶性抗体奠定了基础 Keywords:stomach neoplasms;antibodies，neoplasms;bac-teriophages Abstract:AIM To cotruct a phage display library of hu-man IgG1Fab antibodies from lymph nodes of gastric cancer patients using phage display Total RNA was isolated from lymph nodes of gastric cancer fragment and kappa light-chain were amplified by RT-PCR and cloned into the phagemid pCOMB3and ex-pressed as a fusion protein with phage M13PⅢin the presence of help phage M13K07，the Fab fusion protein was displayed on the surface of recombinant We have cotructed a phage display li-brary of human IgG1Fab antibodies whose titer was ×1015 pfu#12539;L-1 .CONCLUSION This library could be used to prepare human IgG1Fab antibody. 0 引言 单克隆抗体的出现使肿瘤抗体介导的免疫治疗发生了突破性进展.然而，目前所用的抗体多为动物源性抗体，用于人体会产生异源性抗体反应，影响效果，限制了免疫治疗的发展.使用人源性抗体则可避免异源性抗体反应.但是，用传统方法制备人源性抗体十分困难，1990年代初建立的噬菌体表面展示抗体库技术为制备人源性抗体开辟了一条快捷途径，促进了人源性抗体的发展.我们利用噬菌体表面展示抗体库技术，从胃癌手术患者一级站淋巴结中提取总RNA，构建了胃癌人源性抗体IgG1Fab段的噬菌体表面展示文库，为下一步利用亲和富集筛选技术，获得具有胃癌表面抗原结合活性的融合抗体及可溶性抗体奠定了基础. 1 材料和方法 材料 淋巴结标本采自西京医院胃肠外科，经病理诊断为胃癌病例的一级站引流淋巴结.宿主菌株 XL1-blue由本室保存，含有F’因子，携带四环素抗性基因（Tetr ）.噬菌粒载体pCOMB3含有氨苄青霉素抗性基因（Ampr ），LacZ启动子及噬菌体间隔片段和用于克隆Fd段的SpeI，XhoI克隆位点及用于克隆轻链的XbaI，SacI克隆位点.辅助噬菌体M13K07，为Phamasia公司产品，带有突变型基因Ⅱ，复制起始位点和卡那霉素抗性基因（Kanr ）.RNA提取试剂、限制性核酸内切酶、T4DNA连接酶、DNA纯化试剂盒分别为Prome