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农杆菌转化步骤 农杆菌转化步骤 PAGE 农杆菌转化步骤 micro-tom 种子的处理： ① 75%乙醇侵泡种子：30s，这一步时间不宜过长。 10% Naclo 消毒20min，无菌水清洗4-5次，最后一次浸泡半小时。 处理完的种子放到萌发培养基上（MS固体培养基），24±1℃黑暗培养6天，转入光照条件下4-7天，等待长出子叶。 农杆菌转染 三种培养基的配制： 无抗性的生芽培养基：1/2MS + 2mg/l 6-BA + l IBA 抗性生芽培养基：1/2MS + 2mg/l 6-BA + l IBA + 10mg/L Hyg + 250mg/L羧苄 抗性生根培养基：1/2MS + l IBA + 10mg/L Hyg + 250mg/L羧苄 农杆菌的处理 A：转基因的农杆菌，200ul加入20mlLB液体培养基中，并加入10ul （25ug/ml）kana和20ul（ml）Ref，28℃ B：取过夜培养的农杆菌200ul于20mlLB培养基中，不加入任何抗生素，加入10ul AS（100umol/L），28℃ C：取无菌苗子叶，横切，放入菌液侵染15min，无菌纸吸干残留菌液，近轴面朝下，放在无抗性的生芽培养基，暗培养2天 D：2天后取出，放入抗性培养基中，筛选培养。 E：待长出不定芽，再转入抗性的生根培养基，待生根 F：炼苗，移栽 农杆菌浓度在OD600值最好，侵染1