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下一代测序技术的内容概览 高通量DNA测序技术（下一代测序技术 NGS）在过去的15年里已经有了快速的发展，新的 方法也在继续实现商业化。 随着技术的发展， 对基础和应用科学中的相关应用范围也在增加。 这篇综述的目的是提供一个对 NGS方法论的概述以及相关的应用。每个简要的讨论之后都 跟有制造商和基于网页的可视化。关键词搜索，例如用 Google，可能也会提供有帮助的网 页链接和信息。 方法的建立 DNA 测序方法的建立是 Sanger 双脱氧合成法以及 Maxam-Gilbert 的化学裂解法。 Maxam-Gilbert化学裂解法是基于 DNA的化学修饰然后在邻近修饰过的核苷酸附件的位点进 一步裂解DNA骨架。San ger测序采用了特殊的链终止核苷酸（双脱氧核苷酸） ，它缺少一个 3 ‘0H连接位点。因此，不能够在 DNA聚合酶的作用下合成磷酸二酯键，结果是正在伸长 的 DNA 链在该位置终止了。双脱氧核苷酸是具有放射性的或者具有荧光标记的，便于分别 在测序凝胶或者自动测序仪器上识别。尽管原始的 Maxam-Gilbert 方法的化学特性已经被进 行修饰来帮助消除有毒性的反应物，但是 Sanger测序通过合成双脱氧核苷酸的方法已经变 成了一种测序的标准。 Sanger测序法在1977年被创建，并且在UNIT7.4中被详尽的描述了。 尽管通过当前NGS 标准测序相对较慢，但是在 Sanger 末端终止法的改进，自动化，以及商业化这些方面已经 使它能够在当前的多种应用范围中成为最适当的测序方法。 特别的， 超薄的凝胶板电泳已经 被多通道毛细血管电泳代替了， 逐渐还出现了自动填充可循环的毛细血管以及电动样品加样， 这对提高Sa nger测序过程的速度与便利性有很大的贡献。在 San ger测序中已经出现的最显 著的创新点有：（1）荧光染色的发展，（2）采用末端循环测序降低所要求的输入 DNA的质 量并且用耐热聚合酶高效准确的将终止物染色与正在伸长的 DNA链结合起来，（3）解释和 分析序列软件的发展。在自动化的 Sanger测序项目中的主导者是 Applied Biosystem （AB）。 当前商业化的AB测序仪全部使用的是荧光染色和毛细管电泳（ CE）。用于DNA测序或者片 段分析协议的机器的容量在发生改变， 4 组毛细血管（ SeqStudio Genetic Analyzer）， 8 到 24 组毛细管（3500 Series Genetic Analyzer），以及 48 到 96 组（3700 Series Genetic Analyzer）。 所以的这些测序仪产生了 600-1000 个碱基的正确的序列。尽管多年以来，不同种类基于 San ger测序的测序仪器已经被引进，包括来自 Licor, Amersham，MilliGen， Perkin Elmer和 Dupo nt，所以的这些除了 AB仪器都已经被停产了。 San ger测序技术在一些应用中任然非常有用，而这些应用中高通量测序是不被要求的。 一些DNA测序的核心设备和以测序来获利的公司提供了 San ger测序服务。对于个体测序反 应对公共的用法是在一个特殊的模板上用特殊的 DNA引物，例如去检验质粒的构建和 PCR 产物。既然来自大量的商家的用于 DNA纯化的分子生物试剂盒和试剂以及相对较高质量的 合成产物都是可用的,这就使得甚至是相对较大的 Sanger 测序项目都能够在合理的时间框 架和成本范围内完成。 除了检测DNA的序列AB仪器上的毛细管电泳（CE还被应用到测量酶对基于荧光标记 的DNA底物的选择活性，列如，可以分析 DNA片段的大小。毛细管电泳同样能够用来同时 分析一个单反应中的多个底物，产物或者反应介质，通过不同的荧光标记。 CE被用在DNA 聚合酶和 DNA 连接酶动力学,以及包括冈崎片段和核糖核苷酸的删除修复的偶联酶通路的 研究中。AB CE在在糖生物学中也是很有用的，可以用来分析荧光标记的多糖。 第二代测序方法 术语“下一代”隐含着 DNA测序技术发展的下一步，同时也表明将会产生一个以下一代 命名的新技术。 我们更喜欢用下一代, 第三代等这些术语, 因为我们意识到上述的自动化的 AB测序技术才是继采用放射性和凝胶板的 San ger测序技术之后的第二代测序技术。假定这 个命名的保守性， 对大基因组的高通量测序的低成本要求激发了一些第二代或者下一代测序 技术的发展，这些技术除了采用自动化的 Sa nger测序之外，还用了大量的创新方法。由于 自动化Sanger测序技术的商业化的实现，一些技术不再被使用（例如， Solid ， Polinator, Helicos）。这些第二代测序技术和相关的方法将在下面进行描述。 第二代测序技术能够被划