Southernblot实验方法与步骤资料.pdfVIP

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  • 2021-12-12 发布于福建
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Southern blot 实验方法与步骤 用于检测重组 DNA,也可分析 DNA样品中是否有与探针序列同源的 DNA片段。用于基因诊断, 也可验证检测片段的分子量大小。 将 基因组 DNA经限制性内切 酶酶 切,进行琼脂糖电泳, 把 分离后定位在凝胶上的不同分子量的 DNA经碱变性处理, 将凝胶中变性的 DNA转移至一固相 支持滤膜。利用标记的某一 DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的 DNA发生同源性杂交, 利用放射自显影( 化学发光 法或显色法)检测。 (一) 器材:台式离心机,恒温水浴锅,电泳仪,水平电泳槽,杂交炉,杂交袋,尼龙膜 或硝酸纤维素膜,转印迹装置,滤纸,吸水纸,紫外交联仪或 80℃烤箱,摇床, X 线胶片。 (二) 试剂:限制性内切 酶 ,DNA加样缓冲液, DNA Ladder Marker ,0.25M HCl ,变性液 (0.5M NaOH,1.5M NaCl ),中和液( 0.5M Tris- HCl PH

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