致病性大肠杆菌全基因组测序及毒力基因分析_周倩.pdfVIP

　 第５１卷第３期 工业微生物 　 Ｖｏｌ．５１Ｎｏ．３　 　 ２０２１ 年６月 ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｊｕｎ． ２０２１ ｄｏｉ １０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－６６７８．２０２１．０３．００２ ： 致病性大肠杆菌全基因组测序及毒力基因分析 １ １ ２ １ ２ 　 　 　 　 　 　 周倩，王嘉福，冉雪琴，牛熙，黄世会 １． 贵州大学生命科学学院，贵州贵阳５５００２５；２． 贵州大学动物科学学院，贵州贵阳５５００２５ 摘　 要：为了研究导致致病性大肠杆菌致病力差异的主要因素，本试验以分离自仔猪腹泻样的五 Ｐ２１１ Ｐ５５５ Ｐ３２ Ｐ４４４ Ｐ１１１ Ｓ１０６７０ Ｅ２４１９０ 株致病性大肠杆菌（ 、 、 、 和 ）和两株参考大肠杆菌（ 、 ）为实验 材料，通过小鼠感染试验鉴别菌株的致病力，并对菌株进行全基因组测序，分析菌株基因组。结果 Ｓ１０６７０和Ｅ２４１９０病死率为１００％，中等毒株Ｐ２１１和Ｐ５５５ 为４０％，弱毒株Ｐ３２、Ｐ４４４ 显示，强毒株 和Ｐ１１１ 为２０％。七株菌基因组拼接后长度为４６Ｍｂｐ ～５３Ｍｂｐ之间，ＣＯＧ注释到３１８３～３４８３ 个功能基因，ＶＦＤＢ 注释到３８～１２６ 个毒力基因。菌株间毒力基因分析发现，强毒株Ｓ１０６７０含有 Ｓｔｘ ｈｌｙＡ ｈｌｙＢ ｈｌｙＣ ｈｌｙＤ ｈｌｙＥ／Ａ ｅａｅ ｔｉｒ 志贺毒素（ ），溶血素（ ， ， ， ， ），紧密黏附素（ ， ）强毒素基因以及大量 Ｅ２４１９０ ＬＴ ｈｌｙＡ 铁转运吸收系统和分泌系统相关基因。强毒株 含有肠毒素基因（ ）、溶血素基因（ ）、 ＣＦＡ／Ｉ菌毛基因（ｃｆａＡ，ｃｆａＢ，ｃｆａＣ，ｃｆａＤ，ｃｆａＥ）。中等毒株Ｐ２１１也有ＣＦＡ／Ｉ菌毛基因，此外还含有Ｐ 菌毛基因（ｐａｐＡ，ｐａｐＣ，ｐａｐＤ，ｐａｐＨ）和铁摄取系统基因（ｓｉｔＡ，ｓｉｔＢ，ｓｉｔＣ，ｓｉｔＤ）；Ｐ５５５含有１２个ＶＩ分泌 系统基因（ａｅｃ１５～ａｅｃ１９，ａｅｃ２２～ａｅｃ３２）。弱毒株Ｐ３２、Ｐ４４４和Ｐ１１１含有少部分与毒力有关的基因 （如黏附素Ｆｉｍ、侵袭素Ｉｂｅ等）在其他菌株中均存在。综上，可以认为菌株间毒力基因的差异是导 致大肠杆菌致病力差异的重要原因，该结果为大肠杆菌病导致的腹泻等疾病的防治提供理论依据。 关键词：大肠杆菌；致病性；全基因组测序；毒力基因 ［１］ 　 　 大肠杆菌存在于人和动物肠道中，某些大肠 要毒力因子包括毒素、黏附素、外膜蛋白、铁转运系 ［］２ ，其导致 ［７］ 杆菌是导致仔猪腹泻的主要病原菌之一 统和吸收系统等。为研究致病性大肠杆菌致病 的疾病发病率高、发病急、死亡率高、涉及范围广，给 力差异的原因，采用二代高通量测序技术对７ 株不 养猪业造成巨大经济损失，严重影响了养猪业的发 同致病力的大肠杆菌进行全基因组测序，分析毒力 ［３］ 展。然而由该菌引发的疾病目前缺少有效的治 基因的差异，以期解析大肠杆菌的致病因子和致病 疗手段，临床上主要以母体抗原、抗血清、抗生素等 机制。 ［４５］ 为主，容易产生耐药性、药物残留等问题。 １　 材料与方法 大肠杆菌通过黏附素黏附于断奶仔猪小肠上皮 细胞，就定居在小肠上并开始大量繁殖并产生毒素， １１　 材料 产生的毒素被吸收后，引起胃肠道血管、皮下组织和 菌株Ｐ２１１、Ｐ５５５、Ｐ３