从谱图看高效液相故障.ppt

从谱图看高效液相的故障 美国戴 安 公 司 无规律的基线噪音 1、 漏液 ：检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。 2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 ： 检查流动相 3、检测器/记录仪电子元件的问题 ：断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。 4、气泡 （系统内或检测器内）：  a、用强极性溶液清洗系统 b、清洗检测器5、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）       a、用甲醇等极性溶剂清洗流通池 b、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池  6、检测器灯能量不足       a、更换灯  7、色谱柱填料流失或阻塞       a、更换色谱柱  8、流动相混合不均匀或混合器工作不正常       a、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置 有规律的基线噪音 Time (min.) 1、在流动相、检测器或泵中有空气          a、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 2、漏液         a、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。 3、流动相混合不完全        a、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）        a、减少差异或加上热交换器 5、在同一条线上有其他电子设备        a、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。 6、泵振动        基线漂移 可能的原因：  1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）  2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）       a、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。  3、流通池被污染或有气体        a、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸 4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成         a、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂   5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。   鬼 峰 鬼峰——即使不进样也会出现的峰 没有进样 3 7 15 17 问题1- 流动相脏 问题2- 容器污染 问题3- 柱子污染 没有进样 双峰或分叉峰 柱 塌 陷 柱中有死体积（柱头塌陷或柱中有空腔） 过滤片部分堵塞 只有一个双峰——组分的共洗脱 可能原因： 样品与溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配 宽峰 所有的峰都展宽 柱效降低——柱死体积 大进样量 / 质量 高粘度流动相 部分峰展宽 前次进样后流出的组分 大分子量样品——蛋白或聚合物 样品与流动相不匹配 拖尾峰 原因： 部分峰拖尾 二次保留效应——残留硅醇基的反应 小峰紧跟在大峰的后面流出 柱头有污染 金属 所有峰拖尾 额外的柱效应 柱坏/不适当的溶剂 不适当的样品量 前伸峰 负峰 原因: 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 宽 峰 柱外体积增加 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量或降低样品浓度 保留时间不断变化 1、流速变化     a、重新设定流速 2、泵中有气泡     a、从泵中除去气泡 3、流动相选择不恰当     a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相 4、色谱柱没有平衡     a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱  b、新安装的柱没有达到稳定状态