荧光分光光度法.pptxVIP

1;;2荧光分析法：利用物质的荧光谱线波长和强度进行定性定量分析方法 。;③TLC定性、定量;11.2 基本原理;自旋量子数S: 0 0 1;;;(1)振动弛豫：非辐射热释放 10-12秒;(5)体系间的跨越:S→T 降低荧光强度;1. 荧光光谱(发射光谱):;(1)不同强度的光照射物质所产生的荧光光谱形状是否相同？ (2)不同波长的光照射物质所产生的荧光光谱是否相同？ ;特征:(1) stokes位移：λemλex 说明在激发和发射之间存在一定的能量损失。 产生原因：振动驰豫、内转换 ;第13页/共36页;1、物质产生荧光的必要条件 A 强吸光结构，共轭π—π* B 高荧光效率。;2、分子结构与荧光效率的关系;B 分子的刚性和共平面性;C 取代基： ①给电子基团使荧光效率增大， 如-OH、-OCH3、-NH2等。 ②吸电子基团使荧光效率减少， 如-COOH、-NO2、-X。 ③中性基团对荧光效率影响不大。 如-R、NH3+等。;12.2.4 影响荧光的外界因素;3、 pH值：酸度改变了弱酸弱碱的结构，从而使其荧光效率受到影响。分子状态最强;5、散射光的影响;荧光光谱;溶剂 λex;如何提高检测精度;定量;第25页/共36页;当时，可得;定量分析方法：;1、灵敏度高(10-9~10-1