血清总胆红素及结合胆红素测定.pptxVIP

1;Ⅰ 重氮反应法测定总胆红素和结合胆红素;【实验原理】  血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重氮反应，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，使检测灵敏度提高。;【检验原理】 总胆红素在附近，在钒酸盐和表面活性剂存在下，可以被氧化成胆绿素。与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中总胆红素的浓度。;【试剂】 1．咖啡因-苯甲酸钠试剂 2．碱性酒石酸钠溶液 3．亚硝酸钠溶液 4．对氨基苯磺酸溶液 5．重氮试剂 6．叠氮钠溶液。 7．胆红素标准液 ;【操作步骤】 1.样品的测定 取3支试管，按下表程序操作. ;2.标准曲线制作 取5支试管，分别编号，然后按表稀释胆红素储存液配制胆红素标准液。; 混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定法操作。每一浓度作3个平行管，并分别做标准对照管，用各自的标准对照管调零，读取标准管的吸光度。配制标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红素，同样测定后得一吸光度值。每个标准管的吸光度值均应减去此吸光度，然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线 ;【参考范围】