DNA疫苗在动物医学中的应用情况研究分析.docxVIP

一、DNA 疫苗简介 DNA 疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒 DNA(有时也可是 RNA)，它可经一定途径进入动物体内，被宿主细胞摄取后转录和翻译表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能刺激机体产生非特异性和特异性 2 种免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。 DNA 疫苗具有许多优点： 1、DNA 接种载体(如质粒)的结构简单，提纯质粒 DNA 的工艺简便，因而生产成本较低，且适于大批量生产； 2、DNA 分子克隆比较容易，使得 DNA 疫苗能根据需要随时进行更新； 3、DNA 分子很稳定，可制成 DNA 疫苗冻干苗，使用时在盐溶液中可恢复原有活性，因而便于运输和保存； 4、比传统疫苗安全，虽然 DNA 疫苗具有与弱毒疫苗相当的免疫原性，能激活细胞毒性 T 淋巴细胞而诱导细胞免疫，但由于 DNA 序列编码的仅是单一的一段病毒基因，基本没有毒性逆转的可能，因此不存在减毒疫苗毒力回升的危险(Davis 等，1999)，而且由于机体免疫系统中DNA 疫苗的抗原相关表位比较稳定，因此 DNA 疫苗也不象弱毒疫苗或亚单位疫苗那样，会出现表位丢失(Donnelly 等，1999)； 5、质粒本身可作为佐剂，因此使用 DNA 疫苗不用加佐剂，既降低成本又方便使用(Babiuk 等，1999)； 6、将多种质粒 DNA 简单混合，就可将生化特性类似的抗原(如来 源于相同病原菌的不同菌株)或 1 种病原体的多种不同抗原结合在一起，组成多价疫苗，从而使 1 种DNA 疫苗能够诱导产生针对多个抗原表位的免疫保护作用，使DNA 疫苗生产的灵活性大大增加。 二、DNA 疫苗的应用 1、猪 、伪狂犬病病毒(PRV) 将编码PRVgC 或 gD 基因的质粒DNA 免疫猪，能诱导保护性抗体的生成和细胞免疫的产生；将编码gB、gC、gD 的多种质粒DNA 混合使用，对引导免疫反应更有效(Gerdts V 等， 1997；Rooij E M 等，1998)。 、猪流感病毒(HIV) Mackling 等(1998)的试验结果表明，编码 HIV1 株的血凝素(HA)和核衣壳蛋白(NP)质粒 DNA 用金颗粒包裹， 以基因枪轰击猪的表皮进行免疫后，HA 质粒 DNA 能使猪产生粘膜免疫反应而对流感病毒的攻击具有抵抗力，DNA 疫苗引起的免疫反应与灭活疫苗相当。 、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRS) PRRS 基因片段ORF5 编码的主要囊膜糖蛋白GP5 是该病毒的 3 个主要结构蛋白之一。含有 ORF5 基因质粒DNA 能诱导猪抗GP5 特异性中和抗体的产生；且免疫猪的外周血单核细胞在GP5 重组蛋白存在时能够发生转化反应，显示了GP5 特异性细胞免疫的产生(Pirzadeh B 等，1998)。Meng(2000)将 GP5 基因克隆入巨细胞病毒(CMV)早期启动子的控制之下构建成真核表达质粒而制备出DNA 疫苗，用其免疫仔猪后可诱导抗体的产生，实验室攻毒后显示出良好的保护效果。 、口蹄疫病毒(FMDV) 将FMDV 全长基因组的cDNA 克隆到质粒， 并去除其编码核衣壳蛋白VP1 的细胞结合部位的DNA 序列，构建成质粒 DNA 以肌肉或皮内注射，初次免疫后 2～4 周，可使所有的猪都产生特异的病毒中和抗体，攻毒试验中呈现部分保护作用(Ward G 等， 1997)。 、猪瘟病毒(CSFV) 余兴龙等(2000)构建了 CSFV 主要保护性抗原 E2 基因 4 种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验结果表明，E2 基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响，有信号肽序列的E2 基因可诱导特异性的免疫反应，且无跨膜区序列的 E2 基因所诱导的免疫应答反应比有跨膜区序列的强，而无信号肽序列的 E2 基因所诱导的免疫应答反应比有跨膜区序列的强，而无信号肽序列的 E2 基因则不能诱导产生CFSV 特异性的免疫反应。攻毒保护试验结果表明，免疫家兔最少可抵抗 10 个最小感染剂量(MID)的猪瘟兔化弱毒苗(HCIV)的攻击；免疫猪可抵抗致死剂量的 CFSV 石门株强毒的攻击。 2、牛 、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) 用 BRSV G 基因构建的 DNA 疫苗，以无针方式免疫小牛时比皮内或肌肉注射引起的免疫反应强烈。 牛疱疹病毒(BHV) 用表达 BHV 1 gD 基因的质粒 DNA 疫苗免疫牛，能产生很高的中和抗体；攻毒试验后发现，免疫组比非免疫组的病毒排放量明显减少(schrijver R S 等，1997)。此疫苗通过肌肉或皮内注射均可引导免疫反应的产生。但皮内注射引起的免疫反应更强(孟松树等，2000)。 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 以表达BVDV1 型主要糖蛋白E2 的质粒DNA 肌肉注射小牛，可产生病毒中和抗体和抗原特异