病毒空斑纯化步骤.pdfVIP

猪流行性腹泻病毒(PEDV)纯化分离方案 (1)将已准备好的VERO细胞消化均匀铺于6孔板中。 (2)细胞长成单层后吸去培养液，将病毒做 10倍稀释，共做5个梯度并向每孔 滴加0.4ml稀释好的病毒液, 置37℃吸附2小时后弃残液。 (3)制备2％的琼脂糖（PCR 电泳胶一样的琼脂糖），置40－50℃水浴待用。 101 102 103 阴 性 104 105 对 照 (4)将上述琼脂糖和双倍维持液（1:1）混合后，加入培养板各孔，每孔 2ml， 使冷却凝固成覆盖层。 (5)把培养板倒置，在37℃二氧化碳培养箱培养48h。 (6)制备含 0.002％中性红的2%琼脂糖：双倍维持液（1:1），置40－50℃水浴 待用。 (7) 吸取上述琼脂加入培养板各孔，每孔2ml，使冷却凝固成第二覆盖层。 (8)把培养板倒置，在37℃二氧化碳培养箱继续培养，48小时内观察结果。 (9)挑出蚀斑下的细胞作病毒的进一步增殖和鉴定。 主要问题： 1、铺完琼脂糖层之后，24h之