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胆汁酸抗艰难类梭菌感染作用机制和应用前景 艰难类梭菌(Clostridioides difficile，C.difficile)是一种革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌，属于条件致病菌，毒素A和毒素B是其主要致病因子，可损伤患者肠壁，诱发炎症反应。艰难类梭菌感染(Clostridioides difficile?infection，CDI)的常见临床症状为腹泻，也可伴有发热和腹痛等，严重者可表现为伪膜性肠炎、中毒性巨结肠、肠穿孔和脓毒血症等，甚至死亡。抗生素的使用是引起CDI的主要原因，抗生素可引起肠道菌群紊乱，从而导致耐药C.difficile过度增殖。胆汁酸作为肠道菌群衍生的代谢物，被认为是肠道菌群与宿主沟通的关键信号分子，其对宿主的正常生理和免疫功能起着重要作用。目前，粪便菌群移植是复发性CDI最有效的治疗方法，其主要的作用机制之一即通过恢复肠道菌群、调节胆汁酸代谢抑制C.difficile生长。因此，探索胆汁酸在CDI发病机制中的作用及其作为CDI新疗法的潜在价值尤为重要。本文通过总结胆汁酸在CDI发病机制中的作用，探讨胆汁酸对CDI新的治疗选择的潜在影响。 一、胆汁酸对CDI的直接作用 1．胆汁酸抑制C.difficile菌体生长和芽孢萌发： 人类结肠管腔满足厌氧条件，C.difficile等专性厌氧细菌能在其中生存。C.difficile形成的芽孢对恶劣环境的抵抗力较强，在高温、有氧和常用消毒剂条件下可以存活，更便于传播。芽孢形成转录因子Spo0A(stage 0 sporulation protein A)对C.difficile芽孢的产生过程至关重要，其失活可导致C.difficile失去芽孢形成能力。Spo0A的表达水平受鸟苷三磷酸-感应转录多效性抑制因子(guanosine triphosphate-sensing transcriptional pleiotropic repressor，CodY)和代谢物调控蛋白A(catabolite control protein A，CcpA)调控，其中营养调节蛋白CodY是一个转录抑制因子，能够显著抑制C.difficile芽孢形成相关操纵子的转录；多效调控因子CcpA是碳水化合物代谢抑制剂，当C.difficile在含有葡萄糖条件下培养时，CcpA可直接抑制Spo0A的表达，进而使其产生的毒素减少。 一般情况下，C.difficile芽孢的萌发和菌体的生长只发生在下消化道，肠道内容物中尤其是胆汁酸会诱导C.difficile芽孢萌发成营养细胞，这一过程由CspBAC基因位点调控。C.difficile芽孢上存在的胆汁酸受体梭菌丝氨酸蛋白酶(clostridial serine protease，Csp)C主要由CspBAC基因位点编码，该基因位点还编码另一种由枯草杆菌蛋白酶家族蛋白中CspB和CspA组成的杂合蛋白CspB-CspA，并且CspBAC基因与芽孢萌发所必需的皮质层裂解酶SleC的激活有关。培养基中加入初级结合胆汁酸牛磺胆酸可极大地促进粪便中C.difficile菌体生长和芽孢萌发，这一过程主要是由牛磺胆酸与C.difficile表面的CspC结合后将信号传递给CspB，CspB激活SleC使C.difficile芽孢皮质层退化，最终导致新的营养细胞生长(图1)。游离的初级胆汁酸对C.difficile有不同的作用，胆酸可促进C.difficile芽孢萌发和菌体生长，而鹅去氧胆酸抑制C.difficile芽孢萌发的能力明显强于胆酸诱导C.difficile芽孢萌发的能力，该过程主要由CspC受体介导。相反，次级胆汁酸如去氧胆酸能够通过下调Spo0A的表达降低C.difficile产生芽孢的效率，其余的次级胆汁酸如石胆酸、异石胆酸、熊去氧胆酸和猪去氧胆酸在生理浓度下也能够抑制牛磺胆酸介导的C.difficile芽孢萌发，这种抑制作用呈剂量依赖性，抑制程度和抗性程度因菌株和核型不同而存在差异(图2)。 注：背景浅蓝色为艰难类梭菌芽孢形成阶段，浅黄色为艰难类梭菌芽孢萌发阶段。P为磷酸化修饰；Spo0A为芽孢形成转录因子；CspC为梭菌丝氨酸蛋白酶C；SleC为皮质层裂解酶；CspB为梭菌丝氨酸蛋白酶B ▲图1?艰难类梭菌芽孢的形成和萌发过程 注：CYP27A1为胆固醇27α羟化酶1；CYP7A1为胆固醇7α羟化酶1；CYP7B1为氧固醇7α羟化酶1；CDCA为鹅去氧胆酸；CYP8B1为胆固醇12α羟化酶1；CA为胆酸；TCDCA为牛磺鹅去氧胆酸；GCDCA为甘氨鹅去氧胆酸；TCA为牛磺胆酸；GCA为甘氨胆酸；BSH为胆盐水解酶；HSDH为羟基类固醇脱氢酶；UDCA为熊去氧胆酸；isoalloLCA为石胆酸衍生物；5AR为5α-还原酶；3βHSDH为3β-羟基类固醇脱