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、伪狂犬病检测方法伪狂犬病病毒分别鉴定 1材料预备 DMEM培育基、BHK-21细胞、新生犊牛血清、青霉素、链霉素溶液、0.22ul 微孔滤膜、细胞培育瓶、C02培育箱、倒置显微镜。溶液配制见附录A(标准的 附录) 2操作步骤病料的采集 对于刚死亡或活体送检并处死的动物，无菌实行肝、脾、肺、 肾及其脑组织，尤其是三叉神经节、嗅球，4℃送试验室检测。 样品处理待检组织在灭菌乳钵内剪碎，加入灭菌玻璃砂研磨，用灭菌生 理盐水或DME培育基制成1： 5乳剂，一7()℃反复冻融后，经3()()()rpm离心30 分钟后，取上清液经0.2211 m微孔滤膜过滤后，加入青链霉素溶液至最终浓度为 100U/mL, —70℃保存作为接种材料。 病料接种 将病料滤液接种已长成单层的BHK-21细胞，接种量为培育基 量的10%, 37c恒温箱中吸附1小时后，加入含10%新生犊牛血清(经过56℃ 水浴灭活30分钟，过滤除菌，无支原体)的DMEM培育基，置37c温箱中培 育。 观看结果 接种后24—48小时，BHK-21细胞应消失典型的细胞病变效应 (Cyto pathogenic effect, CPE),表现为细胞变圆，脱落。如第一次接种不消失 CPE,应将细胞培育物冻融后盲传三代，如仍无CPE,那么判为伪狂犬病病毒阴性。 2.5病毒的鉴定 将消失CPE的细胞培育物反复冻融后，用聚合酶链式反响、荧 光抗