2第二章色谱法分析原理(邹)资料.pptx

第二章 色谱法原理（Principles of Chromatography） 第一节 色谱法及其分类第二节 色谱流出曲线及有关术语第三节 色谱法分析的基本原理第一节色谱法及其分类一、色谱法①定义：是一种分离分析方法 利用各组分在两相中的分配系数不同，当两相作相对运动时，组分在两相中作反复多次的分配，达到分离的目的。 例：GC，PC，TLC，HPLC，等 ②历史A：1903年华沙自然科学学会生物学年会 俄国：M.Tswett 固定相：CaCO3 流动相：石油醚 样品：植物绿叶的色素 1906年 命明为色谱法 （chromatography） 历史B 1931年R.Kuhn重复了上述实验分离样品为类胡萝卜素离子交换色谱法纸色谱法薄层色谱法 历史C 1940年，瑞典科学家：提出吸附液相色谱法d：1941年，Martin，提出分配色谱法， 创立了-气-液色谱法，提出了塔板理论， 气相色谱有了大幅度的发展。e：50年代， GC中，FID ，ECD，TCD的发展f：1956年，Van Deemter提出速率理论g：60年代，HPLC出现h：近几十年，数据处理系统，联用技术二、色谱法分类 1．按两相状态分类气相色谱法GC 气固色谱 气液色谱液相色谱法LC 液固色谱 液液色谱2按固定相的形式分类柱色谱 填充柱色谱，填充柱 开管柱色谱，毛细管柱平板色谱 纸色谱 薄层色谱法3按分离的原理分类分配色谱： 如GC中 气-液色谱，HPLC中液-液色谱吸附色谱： 如GC中 气-固色谱，HPLC中液-固色谱 也就是说，固定相:a: 固-吸 b：液-分4按动力学过程分类 洗脱法： 组分在流动相中的溶解能力不同而分离。又名冲洗法。顶替法： 组分在固定相上的吸附和溶解能力不同，吸附溶解能力差的成分先出峰。迎头法： 样品连续经过固定相，极性弱的先出峰。 5．按固定相的不同材料进行分类 方法 固定相 离子交换色谱法（LEC） 离子交换剂 凝胶色谱法（SEC） 多孔固体 键合色谱法（BPC） 键合固定相 液固色谱法（LSC） 固体吸附剂 液液色谱法（LLC） 液体 纸色谱法（PC） 纸纤维中水 薄层色谱法（TLC） 吸附剂 气固色谱法（GSC） 固体 气液色谱法（GLC） 液体根据以上所述，将色谱法的分类总结于表l中。第二节 色谱流出曲线及有关术语一．色谱流出曲线 1定义： 被分离的组分经过检测器将浓度讯号转换成电讯号，并记录下来，得到讯号随着时间变化的曲线，称为色谱流出曲线。 以洗脱法为例 流动相对固定相的亲和力比其他任何组分要弱， 当样品进入， 各组分随着流动相的移动在两相之间反复地进行 溶解，挥发，吸附和解吸附的过程。 分配系数不同， 就有可能达到分离。分配系数大的组分，滞留固定相的时间长，移动速度慢，后流出。分配系数小的组分，滞留固定相的时间短，移动速度快，先流出。色谱流出曲线 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内，色谱峰如果对称，可用Gauss正态分布函数表示： 式中：C—不同时间t时某物质的浓度，C0—进样浓度，tr—保留时间，σ—标准偏差。二、基线 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值． 稳定的基线应该是一条水平直线． 基线与：检测器、流动相、体系洁净、仪器的脉动等因素有关。三、峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示，如图中B′A 四、保留值1．死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图中 O′A′。 tM的影响因素与 柱前后连接管道 柱内空隙体积的大小 流动相的流速 等因素 有关。 平均线速ū因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相的流动速度相近．测定流动相平均线速ū时，可用往长L与tM的比值计算。2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间， 如图3 O′B．它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间． tR的影响因素：与组分性质、流速、流动相、固定相有关。 3．调整保留时间tR′ 某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR′ = tR-tM tR包含了 组份在流动相中所需的时间， 组份在固定相中滞留所需的时间， tR′实际上是组份在固定相中停留的总时间． 保留时间的单位、影响因素 保留时间可用时间单位（如s）或距离单位（如cm）表示。 保留时间和保留体积保留时间是色