大肠杆菌感受态细胞制备.docxVIP

大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天： .将适合菌株（如XLl-Blue, DH5。）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在 37° C下过夜培养.高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用 .准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天： .转移0.27ml过夜培养物至装有500ml LB （或其他营养丰富的培养基）的1-2 升挡板￡恐？ . 37° C下剧烈振荡培养2-6小时.定时监控值（培养1小时后每半小时测定一次） .当0. D. 600值到达0. 5-L 0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15 分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）.细胞在4° C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4° C的10% 甘油中保存一两天） .用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几 毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。 .照上面步骤重复离心，小心弃去上清液.照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞 .离心，弃上清液.用20nd灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞14.照上面步骤离心，小心 弃去上清液（沉淀可能会很松散） .用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml.将细胞按150P 1等份装入微量离心管，于-80。C保存 转化方法： .在冰上解冻电感受态细胞添加1TO|J 1 DNA ,冰上