(4.3.1)--4.3脱毒的其他方法.pdfVIP

脱毒的其它方法 植物脱毒的方法除了茎尖分生组织培养脱毒、热处理脱毒、茎尖脱毒与热处理相结合 这三种主要方法之外，还有微体嫁接脱毒、花药或花粉培养脱毒、珠心胚 培养脱毒等方法。 1.1 微体嫁接脱毒法 离体微型嫁接脱毒技术是组织培养与嫁接方法相结合、培养无病毒苗木的一种方法。它 是将0.1～0.3mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管苗培育出来的无菌实生砧木上，继续无菌 培养愈合后成为完整植株。常用于营养繁殖难以生根的植物种类或品种，使茎尖培养后的植 株容易生根，且采用茎尖分生组织作接穗，获得的便是脱毒植株。 离体微型嫁接的程序： 无菌砧木培养→茎尖准备→嫁接→嫁接苗培养→移植。 ①砧木培养 种子去种皮后接种子含MS 无机盐的无激素琼脂培养基上，在25±2℃ 下暗培养2 周，再转光照培养。 ②茎尖准备 供体株多用热处理或温室培养植株，对采集的嫩稍消毒和剥取茎尖。 ③嫁接 从试管中取出砧木，切去过长的根，保留4～6cm 根长，切顶留 1.5cm 左 右茎。在砧木近顶处一侧切一个“U”形切口，深达形成层，用刀尖挑去切口部皮层。将茎 尖移置砧木切口部，茎尖切面紧贴切口横切面。 ④嫁接苗培养 微尖嫁接苗一般采用液体滤纸桥方式培养。事先在纸桥中开一小孔， 将砧木的根通过小孔植入液体培养基，按常规光照培养管理。开始可用较低光强 800～ 1000Lx。长出新叶后可提高光强。 ⑤移栽嫁接苗 培养3～6 周，具2～3 片叶时按一般试管苗移植方式移入蛭石、河沙、 椰壳等基质中培养。 离体微型嫁接脱毒主要应用在果树方面。最早在柑橘上采用，之后在苹果、杏、酿酒葡 萄、桉树、山茶、桃、苹果等植物上也获得了成功。目前在苹果和柑橘脱毒上已经发展成一 套完整的技术，在生产上已广泛应用。 影响微体嫁接成活的因素主要是接穗的大小和取样时间。试管内嫁接成活的可能性与接 穗的大小呈正相关，而无病毒植株的培育与接穗茎尖的大小呈负相关。 微体嫁接技术难度较大，不易掌握，但随着新技术的发展与完善，离体微型嫁接技术在 不同植物脱毒方面发挥更大的作用。 1.2 花药或花粉培养脱毒 由花粉培育出愈伤组织再分化出的完整植株含有的病毒很少或几乎不含病毒。用花药培 养途径所获的植株脱毒率最高，也较可靠，而且花药培养过程中大约有2%左右的变异多属 高产类型。 花药培养脱毒法中选择合适大小的花蕾非常关键，尽量选取处于密封状态的小花蕾，此 时的花粉发育期为单核靠边期。 利用花药培养脱毒苗，不仅可快速繁殖出大量无毒植株，还可省去病毒鉴定工作，在育 种与生产应用上可谓一举两得。但大多数植物是杂合体，而花药培养获得的植株是纯合体， 改变了作物的遗传背景，可能导致产量和品质下降，所以，这种方法一般适于自交亲合作物， 或自交不亲合作物优良无病毒育种原始材料。 1.3 珠心胚培养脱毒 这种方法多用在果树作物上，尤其在柑橘类上应用广泛。植物受精产生的种子绝大多数 只形成一个胚，而柑橘的种子常形成多胚，如温州蜜柑、甜橙、柠檬等80%以上的种类都具 有多胚现象。多胚中只有一个胚是受精后产生的有性胚，而其余是珠心细胞形成的无性胚， 一般称珠心胚。通过珠心胚培养可以得到无病毒的珠心胚苗。但珠心胚大多是不育的，必须 分离培养才能发育成正常的幼苗。用此技术对柑橘的主要病毒与类病毒病原体，包括不能被 温热疗法除去的病毒，如引起银屑病、叶脉突出症、柑桔裂皮病、衰退病等的病毒均十分有 效。