细胞的破碎与分离包涵体.pptVIP

外源蛋白在大肠杆菌中的积累 蛋白 产物占菌体总蛋白/% 外源蛋白的积累 人胰岛素 50% 形成包涵体 β -丙酰胺酶 20% 在细胞间区 γ-人体干扰素 25% 形成包涵体 凝乳酶原 形成包涵体 牛生长激素 30% 形成包涵体 β -内酰胺酶 形成间区包涵体 人胰岛素原 5%~26% 形成包涵体 包涵体表达形式的优点 在一定程度上保持表达产物的结构稳定; 能避免细胞内蛋白水解酶的作用，有利于目标蛋白的富集; 简化外源基因表达产物的分离操作; 能够表达对大肠杆菌宿主有毒或有致死效应的目标蛋白 包涵体表达形式的缺点 以包涵体形式表达的重组蛋白丧失了原有的生物活性，必须通过有效的变性复性操作，才能回收得到具有正确空间构象（因而具有生物活性）的目标蛋白。 体外复性蛋白质的成功率相当低， 一般不超过 30% 复性处理工艺可使目标蛋白的制备成本上升。 包涵体的纯化方法 收集菌体细胞 细胞破碎 包涵体的洗涤 目标蛋白的变性溶解 目标蛋白的复性 包涵体获得几种常见的工艺路线(一) 机械破碎 (高压匀浆、高速珠磨） 离心提取包含体 加变性剂溶解 除变性剂复性 包涵体获得几种常见的工艺路线（二） 机械破碎 膜分离获得包涵体 加变性剂溶解包含体 除变性剂复性 1）包涵体的洗涤 细胞