《发酵动力学实验》.ppt

发酵动力学研究的内容 研究发酵动力学的方法 发酵动力学研究步骤 发酵动力学研究的意义 发酵动力学模型 发酵动力学实验设计; 发酵动力学是研究各种发酵过程变量在活细胞作用下的变化规律，以及各种发酵条件对这些变量变化速度的影响。 以化学热力学（研究反应的方向）和化学动力学（研究反应的速度）为基础，对发酵过程中各种物质的变化进行描述。;研究内容;二、研究发酵动力学的方法;;质量平衡式;三、发酵动力学研究步骤;氧需求;四、发酵动力学研究的意义; 发酵过程中，基质主要消耗在：①满足菌体生长消耗②维持微生物生存的消耗③合成代谢产物的消耗;;基质的消耗速度;;3.生长得率：菌体的生长量相对于基质消耗量的收得率。;4.产物得率：产物的合成相对于基质消耗量的收得率。;;莫诺方程成立的假设条件： 菌体生长为均衡型非结构式生长，细胞成分只需要用一个参数即菌体浓度表示； 只有一种底物是生长限制性底物，并且没有反馈抑制性产物出现； 微生物生长没有动态滞后性。; Monod方程中单一限制性基质可以是培养基中任何一种与微生物生长有关的营养物，只要该基质相对缺乏，就成为限制性生长因子。实际过程中，可能出现多种限制性基质和抑制性物质，影响了Monod方程的适用性。; Ks ，微生物对基质的饱和常数,当μ= 1/2μmax，s= Ks 当s Ks，基质浓度很低时，提高S，可明显提高μ，一级反应。 当s Ks，基质浓度较高时，μ与s无关，零级反应。 当s趋近于无穷大时，μ=μmax.μmax是理论上最大的生长潜力。;;莫诺方程与米氏方程 二者形式相同，但微生物生长是细胞群体生命活动的综合表现，机理非常复杂。 Monod方程与米氏方程的区别与联系是： Monod方程是对实验现象的总结，是经验方程（empirical model）； 米氏方程是根据酶反应机理推导得出，是机理方程（mechanistic model）。; 由于微生物的代谢产物，特别是次级代谢产物的合成途径特别复杂，其动力学过程不仅受菌体自身基因型的限制，还与其生活的外部条件有密切关系。目前整个动态变化过程的规律仍不是十分清楚，大多数研究只是限于宏观变量的非结构模型。;根据细胞生长与产物形成是否偶联进行分类 ; 偶联型：产物生成速率与细胞生长速率有紧密联系，合成的产物通常是分解代谢的直接产物，如葡萄糖厌氧发酵生成乙醇，或者好气发酵生成中间代谢物(氨基酸或维生素)。这类初级代谢产物的生产速率与生长直接有关。式中α0，β＝0; 非生长偶联型：在生长和产物无关联的发酵模式中，细胞生长时，无产物，但细胞停止生长后，则有大量产物积累，产物的形成速率只与细胞积累量有关。产物合成发生在细胞生长停止之后(即产生于次级生长)，故习惯上把这类与生长无关联的产物称为次级代谢产物，但不是所有次级代谢产物一定是与生长无关联的。大多数抗生素和微生物毒素的发酵都是非生长偶联的例子，非偶联型发酵的生产速率只与已有的菌体量有关，而比生产速率β为一常数，与比生长速率μ没有直接关系。因此，其产率和产物浓度高低取决于细胞生长期结束时的生物量。式中α＝0，β0;4、微生物的基质消耗动力学;微分后：;六、发酵动力学实验设计;发酵培养: 5 L 发酵罐中装入3.5 L 的发酵培养基，培养基在在121 ℃下灭菌30 min，温度降至30 ℃时，接入种液，接种量为4%．控制适宜的通气比、保持罐压为0.05 MPa、发酵温度30 ℃、搅拌速度160 r/min条件下发酵84h．每12 h 取样1 次进行菌体生长量、还原糖产量、蔗糖糖消耗测定．结果为3 次重复。;还原糖的测定：（1）在碱性条件下，还原糖与3、5－二硝基水杨酸共热，3、5－二硝基水杨酸被还原为3－氨基－5－硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计算，可求出发酵液中还原糖的含量。 ;加完试剂后, 将各管摇匀，戴上小漏斗，在沸水浴中加热5分钟，立即用冷水冷却至室温，再向各管中加入蒸馏水 20.0ml，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀。切勿用力振摇，引入气泡。在540nm波长下，以0号管为空白，在分光光度计上测定出各管溶液的吸光度值。 （3）以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算样品中还原糖的百分含量： 还原糖％＝ ;蔗糖测定：蔗糖经6?mol/L盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定。水解前后还原糖的差值为蔗糖含量。