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微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 一、实验目的 1.学习微量凯氏定氮法的原理 2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等） 二、实验原理 凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。 当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。 此过程进行的相对较为缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。 消化过程： 蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热 （2）向另一烧瓶加入1ml水作空白对照； 在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂）少许，浓硫酸10ml，小瓷片两粒，摇匀； （3）将烧瓶约60度角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电炉上消化； （4）在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈； （5）待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止； （6）消化完毕，待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水10ml（注意慢加，边加边摇）； （7）冷却后将瓶中内容物转入100ml的容量瓶中，并用蒸馏水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度摇匀，做上