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HE石蜡切片步骤 一、苏木精-伊红对染法 ——paraffinsection 一、器材及试剂： 切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培 养皿，镊子，单面刀片，毛笔，上皮组织盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，一棵 胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。 切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖学针，单面刀片，大 台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 中性福尔马林紧固液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染 液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（carnoy）紧固液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇 液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘 油蛋白黏片剂，中性树胶。 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、 蚕豆的木、茎、叶等。 二、实验原理： 石蜡切片就是最基本的切片技术，冰冻切片和轻薄切片等都就是在石蜡切片基础 上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称h.e.对染法）是组织切片最常用 的染色方法。这种方法适用范围广为，对组织细胞的各种成分都可以着色，易于全系列 面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保 存有。经过he染色，细胞核被苏木素涂成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈圆形粉红色。 三、试剂配法： 1．中性甲醛紧固液： 甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100ml 磷酸氢二钠6.5 磷酸二氢钾（钠）4g 双蒸水900ml 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品 3．1%盐酸乙醇液 70%酒精100份 4．甘油蛋白张贴片剂： 蛋白50ml 甘油50ml 水杨酸钠（防腐剂）1g 酿制时将鸡蛋一个超越进碗或杯中，回去蛋黄遗留下蛋白，用玻棒调打为雪花状 泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋 白液。此时在其中再提等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后重新加入防腐剂（水 杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。 四、实验步骤： 颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。 制做的非政府块不必太小，以利紧固剂反射，通常以5mm×5mm×2mm或10mm×10mm×2mm为宜。摘下所须要的肝非政府，切开一小块2－3mm薄。注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应当根据须要观测的部位展开挑选，尽可能不要受损所须要的部分。 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30－50min。 （1）通常紧固液，都以崭新吊打不好，包好后应当储藏在阴凉处，不必放到日光下，以免引发化学变化，丧失紧固促进作用。 （2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。 （3）紧固材料时，紧固液必须充裕，通常为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应当更改1-2次新液。 （4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。 材料经紧固后,流水冲洗，数小时或过夜。 材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。各 （1）水解必须在装横的玻璃Fanjeaux中展开，避免稀释空气中的水分。 （2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。 （3）在低浓度酒精中，每级逗留不必太短，否则极易并使非政府变硬，助长材料的解体。 （4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。 （5）例如须要过夜，应当逗留在70%酒精中。 （6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象 纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯ⅰ15min、ⅱ15min（至透明化年才）。 由于乙醇