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重组质粒的构建、转化、筛选和鉴定
实验目的:
学习在实现 DNA 体外重组过程中,正确选择合适的载体和限制性内切酶并能对限制性核酸内切酶对载体和目的 DNA 进行切割,产生利于连接的合适末端。
学习设计构建重组 DNA 分子的基本方法,掌握载体和外源目的 DNA 酶切的操作。
学习利用 T4DNA 连接酶把酶切后的载体片段和外源目的 DNA 片段连接起来,构建体外 DNA 分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方式。
掌握利用 Cacl2 感受态细胞的方法。
学习掌握热击法转化 E.coli 的原理和方法。
掌握α互补筛选法和 PCR 检测法筛选重组子的方
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