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Cas9 Nuclease EN301-01/02 Version 5.1 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 Cas9 Nuclease是一个RNA导向的序列特异性双链DNA内切酶。向导RNA通过与靶序列互补来识别靶位点，并将Cas9 Nuclease带到靶 DNA上。Cas9 Nuclease有两个切割活性中心，分别切割靶DNA的两条链从而产生DNA双链断裂。切割位点为靶向区域内和NGGPAM 相距三个碱基处。本产品是克隆Streptococcus pyogenes的Cas9基因后在大肠杆菌中表达纯化的高纯度Cas9活性蛋白。 产品组成 组 分 EN301-01 (50 pmol) EN301-02 (250 pmol) Cas9 Nuclease 50 µl 250 µl Cas9 Nuclease Reaction Buffer (10×) 1 ml 1 ml 储存条件 -20°C保存。 反应条件 1 ×Cas9 Nuclease Reaction Buffer, 37℃孵育。 单位定义 1单位指30℃条件下反应10分钟，能将0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。 质量控制 蛋白纯度检测：通过SDS考马斯亮蓝染色，Cas9 Nuclease蛋白纯度大于95%。 RNA酶残留检测：在10 µl Cas9 Nuclease反应体系中加入40 ng RNA和1 pmol Cas9 Nuclease, 37℃孵育4个小时，通过琼脂糖凝胶电泳检 测，大于90%的RNA保持完整。 内切酶活性检测：在50 µl Cas9 Nuclease反应体系中加入0.6 µg Supercioled pBR322 DNA和1 pmol Cas9 Nuclease, 37℃孵育4个小时， 电泳条带不发生变化。 外切酶活性检测：在50 µl Cas9 Nuclease反应体系中加入1 µg λHind Ⅲ和1 pmol Cas9 Nuclease，37℃孵育4个小时，电泳条带不发生变化。 用途 体外DNA切割 基因组改造 诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@ Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@ 使用Cas9 Nuclease体外切割DNA操作方案： 为了保证最高的切割效率，Cas9 Nuclease和sgRNA与target DNA的摩尔比例至少为10:10:1或者更高。一般使用30 µl体系，但也可以等比 例放大。实验前请用无核酸酶的水将sgRNA稀释到300 nM ，同时用无核酸酶的水将DNA稀释到30 nM。 1. 按下列顺序配制反应体系: Nuclease-free water 20 µl 10×Cas9 Nuclease Reaction Buffer(10×) 3 µl 300 nM sgRNA 3 µl 1 µM Cas9 Nuclease 1 µl 总体积 27 µl 2. 37℃孵育10分钟。 3. 加入3 µl 30 nM的DNA 4. 震荡混匀并短暂离心收集。 5. 37℃孵育1小时。 6. 反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳分析 注：请佩戴口罩并使用无核