DNA的提取和电泳实验报告.pdfVIP

基因组DNA 的提取和电泳（实验五）实验报告 一、实验目的 了解DNA 提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA 技术。 二、器材和试剂 1. 器材 水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等 2. 试剂 1. 1mol/L Tris.Cl(pH8.0) 的配制：称取12.11g 的Tris ，置于80 mL 的ddH 0,加入浓盐酸 2 （约4.2 mL）,调节pH 值至8.0 ，定容至100 mL。 2. 0.5 mol/L EDTA(pH8.0) 的配制：18.61g Na EDTA·2H O ，加入 80 mL 的 ddH O,用 2 2 2 NaOH 颗粒调pH 值至8.0 （约需2 g），定容至100 mL。 3. 提取缓冲液的配制： 100 mmol/L Tris.Cl(pH8.0), 20 mmol/LEDTA, 500 mmol/L NaCl, 1.5%SDS 4. 80/4/16 氯仿：异戊醇：乙醇 5. 6 ☓Loading buffer ：0.15 ％溴酚蓝，0.15 ％二甲苯青FF ，5 mmol/L EDTA ，50 ％甘油 6. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 54g 27.5g 硼酸 445 mmol/L Tris 碱 445 mmol/L 20 ml 的0.5 mol/L EDTA （pH 8.0 ） 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 补足1L 三、实验步骤 1. 在 15mL 的离心管中加入5mL 的提取缓冲液，60℃水浴预热。 2. 植物叶 1-2g ，剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状， 60℃水浴保温20 min ，其间不时缓慢摇动。 3. 5000 rpm 离心5 分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中， 4. 加入 5 mL 氯仿/戊醇/ 乙醇溶液，颠倒混匀 （需带手套 ，防止皮肤损伤），室温下静置 5-10 分钟，使水相和有机相混匀。 5. 室温下离心5000 rpm 离心5 分钟。 欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！ 6. 仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出 现絮状沉淀。 7. 离心5000 rpm ，离心5 min ，弃去异丙醇，室温晾干。 8. 视沉淀多少，加入1mL 左右ddH O 溶解，可在60 ℃水浴中放置15 分钟以上助溶。 2 9. 取DNA 样品5 µL ，加入1 µL6 ☓Loading buffer ，混匀，加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔 中，电泳，检测DNA 的分子大小。 4 、实验结果和讨论 实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保 102 班的同学一起做的，我们组 3 人，实验 过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。 下面是实验过程中的