抗体工程-蛋白质工程.ppt

2022-11-14 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 选用丝状噬菌体(M13、fd)，其DNA呈单链。 一般在其外壳蛋白基因信号肽序列与编码成熟的蛋白序列之间插入外源基因：人Ig基因片段。用特定的限制性内切酶酶解扩增出来的cDNA，克隆进入丝状噬菌体载体中，即与外壳蛋白pⅢ 或pⅧ的基因连接形成融合基因。 2．噬菌体表达载体的构建 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 一般插入后不影响表达系统功能，在此融合基因中，人 Ig 基因片段多位于噬菌体基因的上游5ˊ端，在细菌中可以表达。一般作用的载体都是经过改建的，即含有LacZ启动子、核糖体结合位点(SD序列)、前导肽序列(保证分泌)和多克隆位点等，其后为M13外壳蛋白(pⅢ或pⅧ)。 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 噬菌体抗体图示 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 3．重组噬菌体DNA导入细菌进行人Ig片段表达 表达出的人Ig片段位于噬菌体外壳蛋白N端，但此融合蛋白不形成包涵体，在细菌信号肽引导下到达质周腔，Ig片段在此能自发折叠成天然状态，恢复生物活性。 同时，外壳蛋白构成噬菌体外壳后，抗体分子蛋白处于其N端，分布在噬菌体表面。 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 抗体库的构建 2022-11-14 抗体工程-蛋白质工程 4 单链噬菌体有效筛选