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尿蛋白定性与定量检测方法分析 寇筱囡 【摘要】观察尿蛋白定量与定性检测方法,评价尿蛋白定量和定性检测方法对蛋白 尿的诊断价值.尿蛋白测定是肾脏疾病诊断的基础,检测方法包括定性、定量及蛋白 质分类.目前应用较广的定性方法包括磺基水杨酸法、加热乙酸法、干化学试纸法. 尿蛋白定量测定是肾脏疾病不可缺少的检查方法,所得结果是总尿蛋白.目前常用的 方法有浊度法、染料结合法、化学比色法. 【期刊名称】《中国现代药物应用》 【年(卷),期】2012(006)005 【总页数】2 页(P43-44) 【关键词】尿蛋白;定性检测;定量检测 【作者】寇筱囡 【作者单位】163001,黑龙江省大庆油田总医院 【正文语种】中 文 正常尿液中仅含微量蛋白质，尿液中蛋白质含量超过 150 mg/24 h 的，尿蛋白的 检测可用于初步判断肾脏的功能、协助诊断其他系统多种疾病、进行疾病的动态观 察及疗效评判等。尿蛋白检查可分为定性和定量两大类试验。在进行尿蛋白定性时， 应综合各种因素，具体情况具体分析，选择适宜的方法。尽管定性试验比较方便， 但有时难以反映蛋白尿的实际含量，有条件时，最好进行定量检查。 1 尿蛋白定性检测 1.1 磺基水杨酸法 在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根离子与蛋白质氨基酸阳离 子结合，形成不溶性的蛋白盐沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白质含量。该法灵敏， 极轻微反应无意义。判断结果应及时，否则会使阳性增高。 1.2 加热乙酸法 掌握加热乙酸法检测尿蛋白的原理、方法、注意事项及质量控制。 加稀乙酸使尿液 pH 减低并接近蛋白质等电点(pH 4.7) ，促使变性凝固的蛋白质进 一步沉淀，并可消除因加热使磷酸盐或碳酸盐析出造成的浑浊。为避免因盐类析出 所致假性浑浊，操作时务必按照加热、加酸再加热的程序。加入乙酸的量要适当， 约为尿量 1/10 ，过多或过少均影响结果准确性。加热试管上段的尿液，以便与下 段尿液形成对照。加热乙酸法是最经典、最准确的方法。 1.3 干化学试带法 了解常用干化学试带模块 3 ～7 的化学组成、操作方法及注意事 项。利用指示剂的蛋白质误差原理，蛋白质与指示剂的离子(溴甲酚蓝、四溴酚蓝 二酯)相结合生成复合物，引起指示剂的进一步电离超过尿液的缓冲能力，指示剂 则发生颜色变化。颜色的深浅与蛋白质含量成正比。三联或多联干化学试带，广泛 pH 试纸。新鲜尿液。测定尿液 pH 如尿液 pH ＜3 或 pH ＞8 应调至 5 ～6。检测将 试带浸入尿中立即取出，吸去多余尿液，1min 内与标准色板比色［1 ］。试带应 干燥、避光保存，远离酸性和碱性物质。浑浊尿不影响比色，但尿液颜色异常将影 响结果的观察。 2 尿蛋白定量试验 2.1 浊度法 也叫蛋白质沉淀法，是目前测定尿蛋白含量最常用的方法，它是利用 沉淀剂加人尿中使蛋白质沉淀而形成一定的浊度，经光度计或散射浊度计直接测定 悬液中粒子的散射光。 2.2 染料结合法 2.2.1 直接法 通过染料与蛋白质结合时，其最大吸收率的漂移来检测的。优点是蛋 白质与染料结合快速，呈色稳定、灵敏度高。缺点是阳离子和非离子型表面活性剂 对呈色反应有正干扰，阴离子型表面活性剂有负干扰。考马斯亮蓝染料易附着于玻 璃容器表面，影响试验的准确性和精密度。2.2.2 沉淀法 是蛋白质与结合的染料在 TCA 作用下共同沉淀下来，然后在稀碱溶液中复溶，再比色测定染料吸光度。常 用染料:丽春红 S、苯胺蓝［2 ］。优点是白、球蛋白反应较一致，灵敏度高。缺点 是操作费事，不能自动化，未结合染料不易除尽，酸可溶性蛋白不被酸沉淀，可使 结果偏低，氨基糖苷类可使测定结果偏高。 2.3 化学呈色法 利用试剂中无机离子与蛋白肽键反应而显色，不管蛋白质的种类 如何，其肽键是一致的，反应颜色与肽键量成正比。常用的反应试剂 :双缩脲试剂、 福林(Folin)试剂、氧化铁一鞣酸试剂。在酸性沉淀剂中，钨酸沉淀蛋白质较完全， TCH 不能沉淀某些低分子量糖蛋白。与其他方法比较，化学呈色法敏感性适中， 干扰因素少，双缩脲法被推荐为尿总蛋白质测定的常规参考方法。 3 讨论 尿蛋白测定易受一些因素的影响，可致假性结果，如尿酸盐含量高时，尿呈酸性反 应，蛋白试纸法结果较实际情况低，磺基水杨酸法易呈假阳性 ;大量使用青霉素时， 磺基水杨酸法易呈假阳性反应;使用造影剂时，磺基水杨酸法、加热醋酸法均可出 现假阳性反应;当尿呈强碱性时，出现蛋白试纸法假阳性反应，而磺基水杨酸法和 加热醋酸法呈假阴性反应。