细胞免疫检测技术.ppt

关于细胞免疫检测技术;背景知识 免疫检测技术 实验内容;细胞免疫;第四页，共三十九页，2022年，8月28日;检测对象;应用范围;T细胞表面受体;T细胞亚群;1. E玫瑰花环形成试验 erythocyte rosette test;左:（甲紫染色，800×）：可见2个被绵羊红细胞包围而形成玫瑰环的T淋巴细胞； 右:（吖啶橙染色）：图中可见3个染成橙黄色荧光的T淋巴细胞被绵羊红细胞所包围。;B细胞没有红细胞受体，但有免疫球蛋白Fc受体和补体C3受体，故可用抗红细胞抗体（A）或者补体（C）搭桥，形成EA玫瑰花环实验和EAC玫瑰花环实验。;2.流式细胞术;第十三页，共三十九页，2022年，8月28日;将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷 酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。;流式细胞术--- T细胞亚群;第十六页，共三十九页，2022年，8月28日;3. 间接免疫荧光法检测淋巴细胞CD抗原;4. 免疫磁珠分离法;磁珠分离策略：;磁珠标记非目的细胞;5. 固相酶联免疫斑点技术 ELISPOT ;与ELISA的区别 ;图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法（下图）分别测量产生 IFN- 的细胞的数目。 ;第二十四页，共三十九页，2022年，8月28日;6. T淋巴细胞转化实验;;淋巴细胞转化试验方法 ;形态计数法;MTT 法;同位素法;同位素法优势;实验步骤;;原儿茶酸对SPF鸡的免疫刺激试验;淋巴细胞分离液的原理;鸡外周血淋巴细胞增殖实验;第三十七页，共三十九页，2022年，8月28日;谢谢;感谢大家观看关于细胞免疫检测技术;背景知识 免疫检测技术 实验内容;细胞免疫;第四页，共三十九页，2022年，8月28日;检测对象;应用范围;T细胞表面受体;T细胞亚群;1. E玫瑰花环形成试验 erythocyte rosette test;左:（甲紫染色，800×）：可见2个被绵羊红细胞包围而形成玫瑰环的T淋巴细胞； 右:（吖啶橙染色）：图中可见3个染成橙黄色荧光的T淋巴细胞被绵羊红细胞所包围。;B细胞没有红细胞受体，但有免疫球蛋白Fc受体和补体C3受体，故可用抗红细胞抗体（A）或者补体（C）搭桥，形成EA玫瑰花环实验和EAC玫瑰花环实验。;2.流式细胞术;第十三页，共三十九页，2022年，8月28日;将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷 酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。;流式细胞术--- T细胞亚群;第十六页，共三十九页，2022年，8月28日;3. 间接免疫荧光法检测淋巴细胞CD抗原;4. 免疫磁珠分离法;磁珠分离策略：;磁珠标记非目的细胞;5. 固相酶联免疫斑点技术 ELISPOT ;与ELISA的区别 ;图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法（下图）分别测量产生 IFN- 的细胞的数目。 ;第二十四页，共三十九页，2022年，8月28日;6. T淋巴细胞转化实验;;淋巴细胞转化试验方法 ;形态计数法;MTT 法;同位素法;同位素法优势;实验步骤;;原儿茶酸对SPF鸡的免疫刺激试验;淋巴细胞分离液的原理;鸡外周血淋巴细胞增殖实验;第三十七页，共三十九页，2022年，8月28日;谢谢;感谢大家观看