实验二细菌基本形态及特殊结构观察.pptxVIP

实验二 细菌基本形态和特殊结构观察第一页，共二十三页。一 目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。 2学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。★ 3 用油镜观察细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢形态。 5 细菌运动性观察。第二页，共二十三页。二 基本原理 １　普通光学显微镜的结构 ２　普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色第三页，共二十三页。１　普通光学显微镜的结构 （1 )　机械系统　　包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2 )　光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。 第四页，共二十三页。第五页，共二十三页。２　普通光学显微镜的光学成象原理（1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积 。目镜： 物镜目镜物镜低倍镜：10X高被镜：40X油镜：100X10X100X第六页，共二十三页。⑵　显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。原因：◆ 油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜◆ 油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜第七页，共二十三页。◆ 分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R） R=λ∕（2NA） (λ为入射光波波长；NA为显微镜数值孔径) NA= η.sinθ η为标本、物镜之间介质的折射率。 θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。 第八页，共二十三页。η低倍镜= η高倍镜=η空气=1.0 ，η油镜η香柏油=1.52θ低倍镜 θ高倍镜 θ油镜 ， sinθ低倍镜 sinθ高倍镜 sinθ油镜NA低倍镜 NA高倍镜 NA油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。 第九页，共二十三页。汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。第十页，共二十三页。3 荚膜染色主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。菌体荚膜第十一页，共二十三页。菌胶团菌胶团： 多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。第十二页，共二十三页。4 芽孢染色细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。菌体芽孢第十三页，共二十三页。菌体芽孢菌体芽孢对有芽孢的菌体进行简单染色（只用一种染料染色）。菌体和芽孢着色情况如何？第十四页，共二十三页。三 实验材料▲细菌基本形态标本片：大肠杆菌片 枯草杆菌片 八叠球菌片▲ 细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片▲ 示范片观察：荚膜片观察 悬滴法观察活细菌的运动 第十五页，共二十三页。四 实验内容及步骤1 细菌基本形态观察2 细菌特殊结构观察3 悬滴法观察活细菌运动第十六页，共二十三页。1 细菌基本形态观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察—— 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌第十七页，共二十三页。菌体菌胶团荚膜芽孢菌体2 细菌特殊结构观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察细菌特殊结构—— 枯草芽孢杆菌芽孢（油镜） 钾细菌荚膜（高倍镜）（示范） 第十八页，共二十三页。3 悬滴法观察活细菌运动悬滴片制好后，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。注意：视野中暗光观察。运动的菌体发亮。第十九页，共二十三页。油镜使用主要步骤▲观察前准备 ：显微镜的准备和调试视野明亮▲低倍镜观察▲高倍镜观察（此步可以省略）▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦▲显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）注意 ！！！ —— 显微镜调焦方法第二十页，共二十三页。五 实验报告绘 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌形态示意图绘枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图 菌 名：大肠杆菌 放大倍数：16×100 X 第二十一页，共二十三页。细菌形态示意图绘图要求：①　选择形态典型的部分细菌细胞绘图。②　仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应 适宜，且形态上应有所区分。③　细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘空心图）。 必须注明菌名、放大倍数。 第二十二页，共二十三页。思 考 题（1）观察细菌染色片时应如何调节光线？ （即如何调亮光，如何调暗光）（2）油镜观测时，是否可以用除香柏油以外的其它液体作 介质？ 第二十三页，共二十三页。