ELISA实验中本底及假阳性产生的原因分析.pdfVIP

ELISA 实验中本底及假阳性产生的原因分析？ 1. 基因工程抗原与合成肽抗原的区别 1.1 基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母 菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比具有以下特点： a.分子量大。合成肽采用化学方法制备，由于工艺的局限，合成数量有限，只能达到数百个氨基 酸；而利用基因工程制备的抗原，分子量更大。 b.稳定性好。包被的抗原的稳定性可使试剂盒的效期得到保证，早期以合成肽为包被抗原的试剂 盒效期只有 3-4 个月，采用基因工程抗原后效期大大延长了。 c.基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达，表达产物包含更多的抗原决定簇，可提高试 剂盒的灵敏度，提高检出率。 d.纯化难度大。基因工程抗原的纯化技术难度较大。 1.2 合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。 合成肽抗原有以下特点： a.分子量太小 b.一般只含有一个抗原决定簇 c.纯度高 d.稳定性差 由于基因工程抗原较于合成肽抗原有无可比拟的优越性，ELISA 诊断试剂经历了从合成肽向基因 工程抗原的过渡。就 HCV ELISA 试剂盒来讲，第一代产品为合成肽抗原，主要是 HCV 特异性抗 原决定簇的肽片段；第二代产品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是当时