致病性大肠埃希氏菌及其检验.pptVIP

二、致病性大肠埃希氏菌的检验 （一）、增菌培养 1、以无菌操作的方法称取样品25g，加入225ml营养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以均质器打碎样品。 2、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大肠菌群MPN，其余移入500ml三角瓶中于36±1℃培养6小时。挑取一环，接种于一管30ml肠道菌增菌肉汤中，42℃增菌培养18小时。 第31页，共50页。 二、致病性大肠埃希氏菌的检验 （二）、分离培养 1、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。 2、于36±1℃培养18—24小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。 第32页，共50页。 EMB平板照片及原理 原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色的（龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。 第33页，共50页。 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板