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生物化学实验的答案 1、理论考试部分 1. 醋酸纤维薄膜电泳时，点样的一端应靠近电极的哪一端？为什么？ 答：负极。因为血清中各种蛋白质在 PH 为 8.6 的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相 斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2. 用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的意义是什么？ 答：空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度， 但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除 溶剂对吸光度的影响。 3. 简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理？ 答：血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而 各种蛋白质等电点不同，且在 PH 为 8.6 时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异， 所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4. 何谓 R 值？影响 R 值的主要因素是什么？ f f 答：Rf 是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf 的大小与物质的结构， 性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关， 5. 什么是盐析？盐析会引起蛋白质变性吗？一般我们用什么试剂做盐析的实验？ 答：盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到 一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和 硫酸铵溶液进行盐析。 6. 简述 DNS 法测定还原糖浓度的实验原理？ 答：还原糖与 DNS 在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而 DNS 被还原为棕红色的 3-氨基-5- 硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与 3-氨基-5 硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光 光度计 测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出 3-氨基-5 硝基水杨酸的浓度，从 而得出还原糖的浓度。 7. 依据我们所做的实验，说明影响蛋白质沉淀的因素是什么？影响蛋白质变性的因素是什 么？沉淀和变性有何联系？ 答：水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒， 在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。 这些因素包括溶 液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。 变性蛋白质不一定 沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。 8. 什么是碘值？脂肪的不饱和程度越大，碘值越大吗？在测定碘值的实验中，氯仿的作用 是什么？ 答：每 100g 脂肪所吸收的碘的克数，即脂肪的碘值。脂肪的不饱和度越大，碘值就越大。 氯仿作为溶剂，去溶解脂肪。 9. 简述薄层层析法分离糖类的原理？ 答:薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸 附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的 泳动速度不同达到分离的目的。 10. 等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？ 答：当溶液的PH 为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的 PH 值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。 11. 在蛋白质显色实验的黄色反应中，反应原理是什么？实验结果为什么会出现深浅不一 的黄色？ 答：含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质 中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一 。 12. RNA 水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？ 答：核糖，磷酸，嘌呤碱。 核糖+苔黒酚—Fe （浓HCI ）绿色物质； 磷酸+钼 酸铵——蓝色； 嘌呤碱+硝酸银——白色。 13. 在等电点时，蛋白质的溶解度为什么最低？ 答：在等电点时，蛋白质在溶液中净电荷为零。蛋白质分子失去了电荷的排斥作用，因分 子运动聚集而沉淀下来。 14. 鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂，为什么？ 答：因为蛋白质可与重金属离子汞、铅等结合成不溶于水的复合物。则鸡蛋清可以代替机 体组织与重金属反应，从而减少汞、铅对机体的损害。 15. 离心管如何在天平上平衡？操作离心机时应注意什么？ 答：把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心 液调平。 注意