黄花蒿中青蒿素含量的测定液相色谱-三重四级杆质谱法.pdfVIP

T/GXAF 0012—2023 黄花蒿中青蒿素含量的测定 液相色谱-三重四级杆质谱法 1 范围 本文件描述了液相色谱-三重四级杆质谱法测定黄花蒿中青蒿素含量的原理，规定了试剂和材料、 仪器和设备、分析步骤、结果计算和表述、精密度等的要求。 本文件适用于黄花蒿中青蒿素含量的测定，检出限为0.25μg/g，测定下限为0.75μg/g。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 用乙腈超声提取试样中的青蒿素，采用基质分散固相萃取剂净化，液相色谱-三重四级杆质谱进行 测定，外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲酸：色谱纯。 5.2 溶液配制 0.1%甲酸水溶液：准确吸取1.0mL甲酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释定容至1L。 5.3 标准品 青蒿素标准品 （Artemisinin,C H O ,CAS:63968-64-9）:纯度≥98%。 15 22 5 5.4 标准溶液配制 5.4.1 青蒿素标准储备液：称取1mg （精确到0.01mg）的青蒿素标准品 （5.3），用乙腈溶解并定容 至10mL，配制成100 μg/mL的标准储备液，-20 ℃以下保存,有效期3个月。 5.4.2 青蒿素标准中间液：根据需要，用乙腈稀释成适当浓度的标准中间液，-20 ℃以下保存。 5.5 材料 5.5.1 微孔滤膜：0.22 μm，有机相型。 5.5.2 N-丙基乙二胺 （PSA）填料：粒径40μm～60 μm。 5.5.3 十八烷基硅烷键合相吸附剂 （C18）：粒径40 μm～60 μm。 1 T/GXAF 0012—2023 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-三重四级杆质谱仪：配有电喷雾 （ESI）离子源。 6.2 离心机：4000r/min。 6.3 涡旋振荡机。 6.4 分析天平：感量0.0001g和0.01mg。 6.5 超声波清洗仪。 6.6 烘箱。 7 试样的制备 样品经烘箱40 ℃烘干、粉碎机粉碎，过60 目分样筛，备用。 8 分析步骤 8.1 提取 称取样品0.1g （精确至0.0001g）于50mL聚丙烯塑料离心管中,加入25mL乙腈，室温振荡3min， 30 ℃超声30min，4000r/min离心5min，取上清液。 8.2 净化 取1mL上述上清液于预先称有20mgPSA和50mg C18 的2mL聚丙烯塑料离心管中，涡旋振荡1 min，在4000r/min离心5min。取上清液过0.22 μm有机微孔滤膜。滤液供液相色谱-三重四级杆质谱 测定。 8.3 测定 8.3.1 高效液相色谱参考条件 a） 色谱柱：BEH C182.1×100mm 粒度1.7 μm，或性能相当者； b） 流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：乙腈； c） 流速：300 μL/min，梯度洗脱程序见表1； d） 柱温：40 ℃； e） 进样量：2 μL。 表1 梯度洗脱程序表 梯度时间 流动相 A 流动相 B min % % 0 80 20 4.5 5 95 6 5